从诱导胰腺癌干细胞多向分化角度探讨胰腺癌清胰化积方治疗后长期带瘤生存机理

前期研究发现清胰化积方为主治疗晚期胰腺癌疗效显著，治后1年生存率25.0%，3年生存率14.1%，5年生存率8.4%，中位生存期7.6月，其中16例获得3年以上长期带瘤生存，5例生存已超过5年,至今15例仍然存活良好。已有研究显示，针对肿瘤干细胞的治疗具有延长肿瘤患者带瘤生存的作用。清胰化积方治疗后胰腺癌患者长期带瘤生存机理是否通过调控胰腺癌干细胞多向分化及其相关的Sonic Hedgehog信号通路实现，即表现为胰腺癌细胞数量变化不明显，但胰腺癌干细胞比例下降，肿瘤生长侵袭转移能力下降，进而使胰腺癌患者能够长期"带瘤生存"。本项目拟通过分离胰腺癌干细胞，建立胰腺癌干细胞NOD/SCID小鼠荷瘤模型，观察清胰化积方对胰腺癌干细胞多向分化能力及对相关Sonic Hedgehog信号通路的调控作用，探索清胰化积方治疗后带瘤生存的机理，为中医药治后患者长期带瘤生存机理研究提供新的思路和方法。

目的：观察清胰化积方对胰腺癌SW1990干细胞的调控作用及对Sonic Hedgehog信号通路的影响。方法：建立胰腺癌干细胞裸鼠皮下移植瘤模型，给予不同药物干预三周，观察肿瘤生长变化，平板克隆检测不同药物对瘤体细胞克隆形成能力的影响。RT-PCR和Western blot 分别检测不同药物对胰腺癌干细胞表面标志物、核转录因子和Sonic Hedgehog信号通路成员mRNA和蛋白表达的影响。结果：清胰化积方体内干预三周后，对SW1990细胞抑瘤率为58.27%，与健择阳性对照组（抑瘤率60.28%）相比，疗效相当(P>0.01)，清胰化积方+健择组表现出更明显的抑制肿瘤生长作用(P<0.01)。清胰化积方干预后瘤体细胞克隆形成能力明显减弱(P<0.01)，胰腺癌干细胞表面标志物CD24、CD44、CD133、ALDH1A1等蛋白表达明显下调，核转录因子SOX-2、Nanog蛋白水平和mRNA水平表达亦减少，Sonic Hedgehog信号通路成员均受到抑制(P<0.01)。结论：清胰化积方抑制胰腺癌干细胞增殖，其机理与下调胰腺癌干细胞表面标志物表达，核转录因子SOX-2、Nanog表达，抑制Sonic Hedgehog信号通路相关。