鸟氨酸脱羧酶抗酶在K562细胞红系分化中的作用及其机制研究

使白血病细胞终末分化，失去恶性增殖能力从而达到完全细胞遗传学缓解，是令人感兴趣的治疗CML的新策略。AZ是细胞内源性的抗酶蛋白，通过调节细胞内多胺水平影响细胞的增殖与分化。有研究表明AZ的过表达与多种肿瘤细胞的良性方向分化相关。基于申请人前期对AZ的研究发现，转染AZ的K562细胞恶性增殖下降，联苯胺阳性率增高，提示AZ有促K562细胞红系分化趋势。故本研究拟利用基因稳定转染和RNA干扰技术分别处理红系分化前后的K562细胞，以细胞的增殖变化、红系分化标志物的表达变化以及TGF信号通路和核转录因子的活性变化为指标，检测AZ对K562细胞红系分化的影响。生物信息学分析并筛选AZ作用的基因，同时采用荧光素酶法、免疫共沉淀法及细胞共定位方法验证，确定AZ基因在K562细胞红系分化中的作用。该研究将深入了解AZ在K562细胞诱导终末分化过程中的分子机制，以探寻AZ为靶点的白血病诱导分化治疗的新策略

使白血病细胞终末分化，失去恶性增殖能力从而达到完全细胞遗传学缓解，是令人感兴趣的治疗CML的新策略。AZ1是细胞内源性的抗酶蛋白，通过调节细胞内多胺水平影响细胞的增殖与分化。有研究表明AZ1的过表达与多种肿瘤细胞的良性方向分化相关。基于前期对AZ1的研究发现，转染AZ1的K562细胞恶性增殖下降，联苯胺阳性率增高，提示AZ1有促K562细胞红系分化趋势。故本研究拟利用基因稳定转染K562细胞，以细胞的增殖变化、红系分化标志物的表达变化以及TGF信号通路的活性变化为指标，检测AZ1对K562细胞红系分化的影响。同时，检测了AZ1过表达对K562细胞凋亡的影响。此外，取43例CML患者和23例健康对照外周血淋巴细胞的总RNA,利用Real-time RT-PCR技术检测了AZ1，TGF-β，GATA1、BCR/ABL的mRNA水平。为了深入了解OAZ1对慢粒白血病K562细胞红系分化、凋亡的分子机制，人源白血病PCR芯片被用于检测参与此分化及凋亡过程的关键基因表达差异。结果显示，AZ1不仅可诱导K562细胞红系分化，还可促进K562细胞凋亡。CML患者群中AZ1、TGFβ均显著下调表达，与体外细胞实验结果相符，体内实验验证了AZ1的抗肿瘤潜力及其与TGFβ基因表达的相关性。芯片结果显示，分化、凋亡相关的基因表达水平显著升高。这些研究成果为进一步深入研究其作用机制以及探寻AZ1为靶点的白血病诱导分化治疗的新策略提供了基础。