基于TSLP相关通路的玉屏风散抗变态反应复发机制研究

依据益气固表代表方玉屏风散广泛用于变态反应性疾病，具有治病求本、抗复发的临床优势与对变态反应的现代认识，在前期工作积累的基础上，提出玉屏风散益气固表法抗变态反应复发的关键机制可能与调控上皮细胞来源的的胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）相关通路密切相关的工作假说。研究内容1）采用整体变态反应模型研究玉屏风散对TSLP及相关信号通路的影响，观察作用环节和产生影响的最早作用时间段，分析作用环节与疾病严重程度的相关性；2）系统研究玉屏风散对TSLP产生通路、效应通路与调节通路信号的影响，以揭示其影响环节和主要作用靶分子；3）利用特异性抑制剂或中和抗体干预，观察对玉屏风散作用的影响，进而反证作用靶分子。通过以上研究，试图阐明玉屏风散抗变态反应复发机制与TSLP通路的相关性，探索益气固表法治病求本的科学内涵，为同类研究提供思路与方法借鉴，同时为TSLP成为药物干预变态反应的靶点提供证据。

依据益气固表代表方玉屏风散广泛用于过敏性疾病，具有治病求本、抗复发的临床优势与对过敏性疾病的现代认识，在前期工作积累的基础上，提出玉屏风散益气固表法抗过敏性疾病复发的关键机制可能与调控上皮细胞来源的胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）相关通路密切相关的工作假说。.主要研究内容1）采用整体过敏性疾病模型研究玉屏风散的效应及对TSLP及相关信号通路的影响，包括玉屏风散对TSLP产生通路、效应通路与调节通路信号的影响；2）利用上皮细胞萃取结合HPLC-MS的方法及血清药物成分分析筛选玉屏风散中可能影响TSLP相关通路的效应成分，并验证其在体内外的作用。.研究结果发现，1）玉屏风散在Th2型过敏性皮炎及OVA诱导的过敏性哮喘模型上，都表现出了明显的抗过敏性炎症的效应；同时在两种模型的致敏初期，可显著抑制局部组织TSLP的产生。进一步研究发现玉屏风散在致敏初期能明显抑制TSLPR的表达，提示对其效应通路的影响；能显著抑制TLR2、TLR3、TLR4等及MyD88、TIRAP、NF-κB的表达，提示对TSLP的产生通路可能的机制；并可降低IL-33、IL-25的水平，提示对相关的调节因子亦有影响。为说明玉屏风散对致敏初期相关因子的影响是否能够影响最终的效应，仅在致敏初期给药，观察Th2型过敏性皮炎模型攻击后炎症的表现，发现仅在致敏初期给药即能明显抑制2型过敏性炎症，说明玉屏风散对致敏初期上皮细胞来源的细胞因子的影响是其产生效应的关键环节。2）通过上皮细胞萃取发现五个成分可能是与上皮细胞结合的成分，分别鉴定为毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、芒柄花苷、亥茅酚苷。同时这些成分均能在血清中检测到。另外血清中药物成分分析发现升麻素及黄芪甲苷亦是主要的入血成分。3）对上述成分的效应的研究发现，升麻素对Th2型过敏性皮炎模型有显著地抑制作用，在致敏初期可抑制IL-33及IL-25，黄芪甲苷与升麻素作用相似，但其抑制TSLP作用明显；二者仅在致敏初期给药都可产生抑制2型过敏性炎症的作用。毛蕊异黄酮及芒柄花素在致敏初期可显著抑制TSLP、IL-33及IL-25的水平。这些结果提示这些化合物是玉屏风散抗过敏性疾病的效应成分。 .以上研究初步阐明玉屏风散抗变态反应复发机制与TSLP通路密切相关，并揭示了与该作用相关的物质基础。同时为TSLP成为药物干预变态反应的靶点提供证据。