筛选胆管癌EMT过程中抗肿瘤效应的核心分子靶点

筛选出癌细胞极化状态调控的分子药靶是阻止癌细胞早期侵袭转移的核心科学问题。申请者前期已完成胆管癌体外EMT的建立，而组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂的发现为寻找理想的肿瘤特异性分子靶点提供了良好的切入点。申请者拟在前期建立HDAC 抑制剂曲古抑菌素（TSA）选择性诱导胆管癌EMT细胞凋亡模型的基础上,用反义文库灭活技术进行胆管癌EMT细胞 cDNA反义表达文库的转染、优化及效应基因的筛选、分离,并采用反义基因表达载体对TSA诱导细胞凋亡效应的阻断效应再鉴定,并在此基础上，进行分离基因阻断HDAC 抑制剂阻断细胞凋亡作用的特征分析；以从繁复的基因组背景中分离并鉴定HDAC抑制剂对胆管癌EMT过程中的关键作用靶点，从而筛选出胆管癌治疗的分子靶点，进而为实施肿瘤死亡的调节机制提供理论依据，为包括HDAC 抑制剂在内新型的非细胞毒抗肿瘤药物的开发打下基础，为胆管癌治疗提供新的途径。

筛选出癌细胞极化状态调控的分子药靶是阻止癌细胞早期侵袭转移的核心科学问题。项目申请者一直以来致力于EMT在消化道肿瘤中的作用及其信号通道调控机制的研究。近年来组蛋白乙酰化在基因转录中的重要调控作用引起人们的广泛关注。决定组蛋白乙酰化状态的酶有两类，即组蛋白乙酰化酶和组蛋白去乙酰化酶。在此基础上，本项目进一步明确了I类HDACs中HDAC2、HDAC3在胆管癌组织中高表达，，并与胆管癌病理分期、病理分化、侵袭转移及预后呈正相关；HDAC抑制剂TSA及SAHA可抑制胆管癌细胞增殖及促进凋亡并诱导G2-M期阻滞；通过基因芯片技术筛选了抗肿瘤效应的核心分子靶点TACC3，发现其在胆管癌组织中高表达并与预后明显相关；应用小分子干扰技术构建TACC3低表达载体，靶向沉默TACC3后通过体内外实验证明具有明显的抑制胆管癌增殖及侵袭转移的功能。从而为阐明胆管癌细胞侵袭转移的调控机制提供新的理论基础，并为其治疗提供新的治疗途径。我们发表论文①The aPKC iota blocking agent ATM negatively regulates EMT and invasion of hepatocellular carcinoma. Cell Death & Disease, 2014年第5卷第3.期. (IF: 6.044)。②3D成像系统在肝门部胆管癌诊断及可切除性评估中的应用.临床外科杂志；2013年第21卷第11期，15-17页。③Silencing of 14-3-3ζ Suppresses Invasion and Metastasis of Human Cholangiocarcinoma by Preventing aPKC-ι from Fostering the Epithelial-Mesenchymal Transition. Oncotarget.(IF: 6.044).已修回。④TACC3, as a Target of HDAC inhibitors Suppresses the Ability of Proliferation and Invasion in Human Cholangiocarcinoma. Oncotarget. [J]. (IF=6.359). 投稿中。培养博士研究生4人，硕士研究生3人。