aPKC-ι/14-3-3信号通路调控胆管癌细胞极化运动的分子机制

癌细胞的极化运动是肿瘤侵袭转移起始阶段的核心环节。申请者首次研究发现，aPKC-ι作为一种调节细胞极化状态的关键性蛋白，在胆管癌及其转移灶中过度表达，同时运用质谱相关技术，筛选出了aPKC-ι的结合蛋白14-3-3。在此基础上，本项目拟进一步明确aPKC-ι的过度表达和激活与胆管癌的转移和预后的关系；采用胆管癌细胞体外侵袭转移的极化运动实验模型，探讨aPKC-ι的过度表达或失活在调节胆管癌细胞极化状态及侵袭转移中的作用；确定14-3-3和aPKC-ι结合的分子机制及二者结合对胆管癌细胞侵袭转移功能的影响；利用分子干预技术阻遏14-3-3和aPKC-ι的结合，从而为阐明胆管癌细胞侵袭转移的调控机制提供新的理论基础，并为胆管癌治疗提供新的治疗途径。

上皮细胞-间质细胞转化和极化重建是肿瘤侵袭转移初始阶段的核心环节，而aPKC-ι是此阶段网络调节的核心靶点。申请者前期研究中用质谱相关技术筛选出aPKC-ι的特异性结合蛋白14-3-3；并在前一个国自然基金资助下研究aPKC-ι在胆管癌中过表达。在此基础上，本项目进一步明确了aPKC-ι/14-3-3-ζ在胆管癌中高表达，并与胆管癌病理分期、病理分化、侵袭转移及预后呈正相关，并且与E-cadherin起协调作用；成功构建了TGF-β诱导Ha-ras 转化的上皮样胆管癌细胞转化成具有高度侵袭转移特性的成纤维样细胞的胆管癌细胞侵袭转移的体外实验模型；HDAC抑制剂TSA通过体外、体内试验证明能诱导人胆管癌细胞(QBC939)凋亡，随着TSA浓度的增加，14-3-3-ζ表达减少，而E-cadherin表达增加；应用小分子干扰技术构建aPKC-ι和14-3-3-ζ表达载体，knock-down14-3-3-ζ后抑制aPKC-ι和促进E-cadherin的表达，来抑制癌细胞EMT过程，进而抑制肿瘤的侵袭转移。从而为阐明胆管癌细胞侵袭转移的调控机制提供新的理论基础，并为其治疗提供新的治疗途径。我们发表论文①The aPKC-ι blocking agent ATM negatively regulates EMT and invasion of hepatocellular carcinoma. cell death & disease(IF: 6.044). 已接收，手稿准备出版中。 ②3D成像系统在肝门部胆管癌诊断及可切除性评估中的应用.临床外科杂志；2013年第21卷第11期，15-17页。 ③ aPKC-ι在TGF-β1和Ras协同导致的肝癌上皮细胞-间质细胞转化中的作用.中华肝胆外科杂志，已修回，中国期刊网收录。培养博士研究生2人，培养硕士研究生3人。