口服白术对口蹄疫疫苗的免疫增强作用及其机理研究

我们的前期研究已经证明中药白术具有口服佐剂作用，给小鼠口服白术水煎液之后免疫注射口蹄疫疫苗，动物对口蹄疫疫苗的免疫应答显著增强。本申请项目在此基础上，进一步研究白术内酯、挥发油和多糖三个主要提取部位对口蹄疫疫苗免疫的佐剂作用，以及口服白术对动物肠道局部黏膜免疫的影响，探讨口服白术增强口蹄疫免疫的作用机理。研究结果对于揭示免疫增强类中药的作用机理，丰富中药的药性理论具有重要的理论意义，也为拓宽白术的应用范围，为今后研究开发免疫增强类中药产品提供依据，具有重要实际应用价值。

本项目研究了中药白术不同提取部位对小鼠免疫增强的活性作用。从生药白术中提取白术多糖和白术挥发油，白术多糖得率为4.2%，多糖含量为86.2%，由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成，物质的量比为：1.00 : 2.49 : 2.07 : 4.94 : 11.33 : 1.35；白术挥发油，油显金黄色，粘稠、有香气，得率为1.185%。. 1. 通过研究白术多糖、白术挥发油和白术内酯Ⅰ对口蹄疫疫苗的免疫增强作用，筛选出了具有免疫佐剂作用的提取物。动物试验表明，口服白术多糖可明显提高小鼠产生的抗FMDV特异性抗体的水平，而口服白术挥发油和白术内酯Ⅰ则不能提高小鼠血清中特异性抗体水平。. 2. 通过观察白术多糖口服给药对小鼠皮下注射口蹄疫疫苗的免疫反应，证明了口服白术多糖能够显著提高小鼠对口蹄疫疫苗免疫产生的免疫应答，促进T、B淋巴细胞活化，并激活Th1和Th2型免疫应答反应，对FMD疫苗具有口服佐剂作用。. 3. 通过观察口服白术多糖对小鼠肠道黏膜免疫系统的影响，证明了口服白术多糖可显著提高小鼠血清中抗FMDV特异性抗体水平。口服白术多糖后1周后，小鼠十二指肠内容物中IgA水平、肠道IgA+浆细胞面积、肠组织TGF-β、IL-6、TNF-α mRNA表达水平以及小肠IEL细胞数目均显著高于对照组。因此，口服白术多糖可提高小鼠肠道黏膜免疫水平，灌胃后1周的效果要高于灌胃后2周。. 4. 通过观察白术多糖通过注射途径有无佐剂作用以及体外对模式识别受体有无作用，证明了白术多糖或黄芪多糖和OVA混合后注射小鼠能显著提高动物血清中抗OVA特异性抗体及亚类IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3水平，说明白术多糖皮下注射后亦具有免疫佐剂作用。白术多糖和黄芪多糖对细胞上清中SEAP的水平没有影响，表明白术多糖和黄芪多糖并不能刺激Raw-Blue细胞NF-κB的表达，对TLRs、NLRs或RLRs等PRRs无作用；. 综上所述，口服白术挥发油和白术内酯Ⅰ对FMD疫苗无免疫增强作用，而口服白术多糖可显著提高小鼠血清的抗FMDV特异性抗体水平，促进T、B淋巴细胞的增殖，提高Th1和Th2型免疫应答，增强小鼠肠道黏膜免疫水平，表明白术水煎剂的口服佐剂作用主要是由白术多糖所引起；白术多糖皮下注射后亦具有免疫佐剂作用。