维药刺山柑耐受佐剂筛选及其在类风湿性关节炎治疗性疫苗研制中的应用

Rheumatoid arthritis (RA) with high incidence is a chronic and systemic autoimmune disease and a common worldwide public health problem. Currently, the clinical efficacy of RA therapeutic drugs is limit. These drugs need to be used in a long time that can cause side effects. Therefore, it is urgent to develop new-types of therapeutic drugs or strategies against RA. Based on immune homeostasis, it is critical in the therapy of RA to recover the Th1/Th2 balance, the frequencies and function of regulator T cells (Tregs). The activation status and cytokines of dendritic cells (DCs) regulate the development of CD4+ T cells including Th1, Th2 and Tregs. Our previous studies showed that the ethanol extract of Uyghur medicine Capparis spinosa (CSE) contained components that could inhibit DC maturation. In this project, we propose the hypothesis: CSE contains components that can be used as tolerogenic adjuvant and RA can be specifically treated by the co-immunization of these components with collagen that can induce antigen-specific Tregs, recover Th1/Th2 balance and inhibit inflammation. This project will provide potential tolerogenic adjuvant for the development of vaccines against autoimmune diseases and new-type of specific therapy strategy for RA.

类风湿性关节炎（RA）是一种全身性、慢性自身免疫疾病，发病率高，严重威胁人类身体健康。目前，临床上常用治疗药物临床效果有限，需要长期服用，且具有副作用。因此，迫切需要开发新型的治疗药物或治疗策略。从免疫自我平衡角度出发，恢复病人体内Th1/Th2免疫平衡及调节性T细胞（Tregs）的数量和功能成为了从根本上治疗RA的关键。树突状细胞（DC）的成熟状态及分泌的细胞因子调控着CD4+ T细胞的分化，包括Th1、Th2和Tregs。我们的前期研究显示，维药刺山柑醇提物含有抑制DC成熟的活性成分，据此提出该项目的假设：维药刺山柑醇提物含有耐受佐剂成分，与胶原蛋白共免疫能够诱导抗原特异性的Tregs，恢复Th1/Th2免疫平衡，抑制炎症反应，从而特异性的治疗类风湿性关节炎。该项目的顺利实施将为自身免疫疾病疫苗的研制提供候选耐受佐剂，为特异性治疗RA提供新的策略。

刺山柑作为传统的治疗风湿病的中药，具有抗炎和免疫调节作用。树突状细胞（dendritic cell，DC）调控T细胞的分化，在类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）致病进程中发挥重要作用。本研究从刺山柑果实中筛选出靶向DC的免疫抑制成分，并对其作用效果及机理进行探讨。我们采用代谢组学和转录组学的方法，比较了新疆吐鲁番、克拉玛依和伊犁刺山柑果实的品质差异，共鉴定出82个化合物，伊犁果实在代谢水平和转录水平上与其他两种果实差异更显著，筛选出15个具有抗炎活性的化合物。但伊犁提取物显著抑制LPS诱导的DC表面分子CD86的表达，三产地果实95%乙醇提取物均显著抑制LPS诱导的DC促炎细胞因子的表达，对TPA诱导的小鼠耳肿胀模型有明显的治疗效果。确定了11个与6-姜酚和阿魏酸合成有关的关键基因。对伊犁果实95%乙醇提取物进行进一步富集和纯化，获得正丁醇相、大孔树脂10%乙醇洗脱相（D10）和95%乙醇洗脱相（D95）三个有效组分。D10和D95均具有免疫抑制效果，能显著抑制LPS诱导的DC表面分子CD40和CD86的表达，降低促炎细胞因子如TNF-α、IL-6和IL-23等的分泌，增加了IL-10的表达，增强DC抗原吞噬能力，降低T细胞增殖能力。D10水溶性更好，D95抑制效果强于D10。对刺山柑中的4个化合物检测了抑制DC成熟的效果，6-姜酚、阿魏酸、香草酸和愈创木酚都具有较好的抑制效果，但6-姜酚作用效果最强，实验结果与分子对接结果一致。通过网络药理学和转录组学探讨作用机制，初步揭示了刺山柑可通过抑制TLR7途径抑制DC成熟。刺山柑提取物对AIA和CIA模型均具有明显的治疗效果。本研究为利用刺山柑开发免疫抑制药物，建立科学的用药策略提供理论依据。