Ezrin新结合蛋白在肿瘤转移中的作用及抑制其结合的抗转移新药筛选

Ezrin是细胞膜和细胞骨架之间的连接分子，它通过结合细胞膜不同蛋白介导多种细胞功能，包括肿瘤转移，但Ezrin参与恶性肿瘤转移的机制并不清楚。我们的预实验表明，高转移性肌肉瘤中，肿瘤转移相关性Ezrin已知结合蛋白表达均低;由此我们此推测，Ezrin还可与其他未知蛋白结合参与肌肉瘤转移。我们的这一推测在预实验中得到了验证。我们综合采用三种筛选方法，在高转移性肌肉瘤中筛选到了三种方法共有的十四种Ezrin 结合蛋白，其中有些是新发现Ezrin结合蛋白。本课题将综合采用三种方法，进一步筛选高转移肌肉瘤和乳腺癌细胞中共有的Ezrin新结合蛋白，研究其与肿瘤的转移的关系、与Ezrin相互作用的分子结构基础及参与两种肿瘤转移的机制，并针对发现的新结合蛋白，筛选小分子文库中抑制其与Ezrin结合的小分子化合物作为抗肿瘤转移药物。这一研究将加深认识肿瘤转移的机制，并有可能发现抗肿瘤转移新药。

背景: 最近的研究发现癌细胞可自分泌神经生长因子前体（The precursor of nerve growth factor，proNGF），促进乳腺癌细胞侵袭，机制与Src 的激活相关联，但Src的激活的下游分子是否包括ezrin和Yap（Yes-associated protein）未见报道。 Nanog是含同源结构域的转录因子，有多个靶基因。近年的研究发现， Nanog可促进肿瘤的转移，但Nanog促进乳腺癌转移是否与其对埃兹蛋白（ezrin）表达和ezrin磷酸化的调节有关，并无相关研究。 主要研究内容和重要结果、关键数据：1. Ezrin和ezrinY477磷酸化在proNGF促进进乳腺癌细胞侵袭中的作用: 1.1 proNGF促进乳腺癌细胞的侵袭能力及ezrin Tyr477的磷酸化; 1.2 proNGF通过激活Src激酶使得ezrin Tyr477磷酸化; 1.3 Ezrin和YAP在胞浆中相互结合；1.4 Ezrin 477位点酪氨酸的磷酸化抑制ezrin与YAP的相互作用，促进YAP的核定位；1.5 YAP入核促进MMP-9的表达。2. Nanog对ezrin的调节及其在乳腺癌转移中的作用: 2.1 Nanog上调ezrin的表达：经启动子序列分析、ChIP实验、EMSA实验和荧光素酶报告质粒实验证实；2.2 敲低乳腺癌细胞中Nanog，ezrin蛋白表达量及pEzrinT567磷酸化水平相应降低 ，PKCɛ蛋白表达量降低；2.3 敲低乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中的Nanog或ezrin，乳腺癌细胞的迁移能力与侵袭能力减弱； 2.4 在乳腺癌细胞系7中，PKCɛ蛋白与ezrin蛋白直接相互作用；2.5 敲低MDA-MB-231细胞中的PKCɛ，pEzrinT567磷酸化水平下降；2.6 乳腺癌原位癌和淋巴节转移癌中，Nanog与ezrin的表达正相关。科学意义： 我们的研究发现:1.神经生长因子前体蛋白促进乳腺癌细胞侵袭新的信号途径与ezrin 477酪氨酸位点磷酸化及YAP核转位有关; 2. Nanog促进乳腺癌转移的机制与Nanog在转录水平上调ezrin的表达及上调PKCɛ蛋白的的表达促进EzrinT567的磷酸化有关。这一研究提示抑制ezrin表达或磷酸化可能有抑制肿瘤转移的作用。