Isthmin免疫脂质体对肺纤维化血管生成的抑制效应及机制研究

近年来的国外研究表明肺纤维化过程中血管内皮生长因子（VEGF）表达上调，导致血管生成增加。因此血管过度生成、调控失衡是肺纤维化形成的重要原因，而血管生成抑制因子低表达可能是关键因素。Isthmin是新近发现的血管生成负反馈调节因子，对抑制血管生成起重要作用。我们前期研究构建了Isthmin腺病毒，并在博莱霉素诱发小鼠肺纤维化模型体内证实Isthmin能有效抑制肺纤维化的血管增生，并减轻肺纤维化的形成。但该分子作用于血管内皮细胞的作用机制和信号途径尚未阐明。本研究拟构建Isthmin真核表达载体，联合血管内皮细胞（EC）的标志性抗原vWf，制备与抗vWf抗体耦联的靶向EC免疫脂质体。并在体外和体内探讨Isthmin免疫脂质体对血管内皮细胞增殖、凋亡调节的信号传导途径及其作用的分子机制，及对肺纤维化小鼠模型血管生成及肺纤维化形成的影响，为肺纤维化防治提供新思路和理论依据。

肺纤维化是呼吸系统难治性疾病之一，研究肺纤维化的发病机制及防治策略有着重要意义。Isthmin是后脑峡部分泌的血管抑制性蛋白，它在肺组织中亦有分布。本项目在前期研究中发现高表达Isthmin能使肺纤维化程度减轻，提示该蛋白可能在肺纤维化中起着一定的作用，但具体作用及机制均未阐明。本研究拟联合血管内皮细胞（EC）的标志性抗原vWf，构建靶向血管内皮细胞Isthmin免疫脂质体，在体外和体内探讨Isthmin对肺纤维化小鼠模型肺纤维化形成、血管生成的影响，及其作用的分子机制。结果：构建Isthmin表达质粒，并制成Isthmin免疫脂质体。成功建立博莱霉素（BLM）诱导的小鼠肺纤维化模型，检测出第7、14、21、28d肺组织匀浆Isthmin表达量逐步下降。给予Isthmin免疫脂质体处理实验动物后，两周内死亡率达100%，遂改为尾静脉注射Isthmin蛋白的方法处理实验动物。经Isthmin干预后，在第28d，Isthmin组（气管滴入10mg/kg博莱霉素+注射Isthmin 10ug/kg）与对照组（气管滴入0.9%NS+注射0.9%NS）比较，肺纤维化程度减轻，胶原沉积减少，肺组织微血管细胞密度有所增加。肺组织VEGF及avβ5未如预期升高及降低，且因VEGF及avβ5分布原因，未进行表达量分析。小鼠Isthmin免疫组化染色提示该蛋白在肺组织主要由Ⅱ型肺泡上皮分泌。根据以上实验结果，可以初步得出以下结论：1、Isthmin可抑制肺纤维化形成；2、Isthmin对肺纤维化的抑制作用主要通过抑制胶原沉积实现，而非抑制血管形成；3、Ⅱ型肺泡上皮可分泌Isthmin蛋白。本课题到目前为止在中文核心期刊发表论著2篇，一篇SCI文章在投。