β-arrestin 2介导的信号通路在肝郁证形成中的作用机制研究

肝郁证是肝病证侯的核心，然而其证侯内涵至今尚不清楚。基于我们前期研究及预实验结果，我们提出"肝郁证是β-arrestin 2介导的CRHR1、ERK和Akt多通路功能紊乱，导致以海马突触可塑性障碍为基本特征的综合病证"的假说，并拟以β-arr2作为肝郁证形成研究的"一个中心"，以其介导的三条信号通路作为研究的"三个基本点"：首先分析三条通路在肝郁证形成中的作用，阐明三条通路与β-arr2关系，并应用逍遥散反证其作用；再者通过"过表达"和RNAi等方法干预β-arr2，明确β-arr2在肝郁证中的作用及其对下游信号通路的"偏爱性"调节；继之以结构域的鉴定，明晰β-arr2调控三条通路的结构域及调控机制；最后整合以上结果，提炼β-arr2及其介导的通路在肝郁证形成中的作用及机制，有望提供一个肝郁证形成标志物，为开发作用机制清楚、靶点明确的新型抗抑郁中药奠定基础。

肝郁证即肝气郁结证，是指肝气疏泄不及而产生的以气机郁滞为特点的证候。主要证侯为抑郁寡欢、多疑善虑、胸膈不畅，并影响心脾、闷闷少食、懒于活动、心慌心怯、失眠多梦，与《国际疾病分类法•第十版》心境障碍的抑郁症必须具备情绪低落（抑郁心境）、兴趣和愉快感丧失以及精力不济或疲劳感中的两项颇为契合。中国抑郁症患者已经超过2 600多万，逍遥散是广泛应用的防治肝郁证的经典方剂，分析、验证并阐明逍遥散防治抑郁症肝郁证形成中的机制，将为从肝论治抑郁症奠定坚实基础。. 主要研究内容为分析β-arrestin 2能否通过介导促肾上腺皮质激素释放激素受体2（CRHR1）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）和 Akt通路防治肝郁证并阐明其调控机制。. 研究发现逍遥散显著改善慢性不可预测温和刺激诱导的抑郁样行为。逍遥散抑制大鼠海马β-arrestin 2表达水平，增加大鼠海马脑源性神经营养因子（BDNF）、酪氨酸受体激酶B（TrkB） 和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达，提高Akt和ERK的磷酸化水平，下调促肾上腺皮质激素释放激素受体2（CRHR2）和尿皮质激素（UCN2），降低HPA轴的过度活化。逍遥散能够增加CUMS大鼠的肝脏窗孔数量，改善肝窦内皮血管化倾向。其改善肝窦内皮功能的作用与其疏肝健脾而致气机疏通、畅达有关，为“肝主疏泄”理论提供了新证据。逍遥散的机制研究表明，其改善抑郁样行为作用与调控5-羟色胺、下丘脑-垂体-肾上腺轴、以及减轻神经炎症有关。丹栀逍遥散显示显著的抗大鼠抑郁样行为作用并降低炎症因子水平，其抗抑郁作用与其抑炎及降低IDO水平并使Kyn/5-HT平衡向5-HT通路迁移相关。. 进一步将应用β-arrestin 2基因敲除（β-arr2-/-）的小鼠，深入研究β-arrestin 2在抑郁症发病中的作用，分析逍遥散类方剂调控β-arrestin 2介导的信号通路防治抑郁症肝郁证的作用机制。