基于血清HBV RNA联合其它生物标志物的慢性乙型肝炎临床治愈预测模型的创建及其机制研究

Recent study showed that patients with long-term anti-HBV treatment could achieve HBV DNA negativity, but with sustained serum HBV RNA positivity. The relationship between serum HBV RNA with off-treatment relapse, HBsAg loss (clinical cure) and cccDNA level was unclear. Our previous work from prospective cohort had demonstrated that the serum HBV RNA level at the end of treatment was associated with the off-treatment relapse. In this study, we aim to evaluate the relationship between serum HBV RNA level and clinical cure, based on the established large-sample cohort (N=3314, 3.4% HBsAg loss) with more than 8 years antiviral duration. Meanwhile, we plan to clarify the underlying mechanism of serum HBV RNA as a predictor, by using in situ hybridization (to detect hepatocyte HBV RNA and cccDNA) and in vitro cell culture model. The objective of our study was to design a clinical cure prediction model based on HBV RNA combined with other biomarkers (HBsAg and HBcAb [FAN Rong, et al. GUT, 2016]), in order to guide clinical practice.

近期报道长期抗乙肝病毒（HBV）治疗的患者HBV DNA转阴后血清HBV RNA仍可持续阳性，但HBV RNA这一新血清标志物与停药复发、HBsAg转阴（临床治愈）以及cccDNA水平的关系尚不明确。我们前期在前瞻性队列发现：抗病毒治疗停药时血清HBV RNA水平与停药后复发相关。本项目拟进一步用建立的大样本长期治疗队列（3314例，抗病毒治疗8年以上，HBsAg转阴3.4%），评价血清HBV RNA水平与临床治愈的相关性。采用肝组织原位杂交技术检测肝组织细胞HBV RNA和cccDNA水平，同时联合体外细胞培养模型探讨血清HBV RNA作为生物学标志物的潜在机制。通过临床与基础研究相结合，本项目拟创建基于HBV RNA联合其它血清标志物（如HBsAg和HBcAb [樊蓉，等，GUT 2016]）的临床治愈预测模型，最终指导临床实践。

慢性乙型肝炎（CHB）患者实现临床治愈是抗病毒治疗的理想终点，但发生率极低，其主要原因为肝细胞核内cccDNA的持续存在。既往研究提示：血清HBV RNA与抗病毒治疗疗效相关，其可能可反映肝细胞内cccDNA转录活性。因此，血清HBV RNA有望成为预测CHB临床治愈的生物学标志物，从而指导临床实践。本项目依托我中心已建成的乙肝长期随访大队列，围绕HBV RNA与其它新型生物学标志物，聚焦乙肝治愈，开展相关基础和临床研究。研究结果包括：.1. 建成HBV RNA检测新方法，首次应用双引物综合评价HBV RNA水平.本项目就HBV基因组中的PreC区域和S区域的核酸序列分别设计了两对引物及其相应的探针，综合评估患者血清的HBV RNA水平。RT-qPCR体系和扩增条件经过优化后，两对引物的扩增效率均在90%-100%之间，均已达到qPCR扩增效率的理论要求。.2. 阐明抗病毒治疗过程中HBV RNA的动态变化.本项目证实血清HBV RNA可反映肝内cccDNA转录活性。利用CHB患者系列随访标本，证实血清HBV RNA在NAs治疗期间呈双相下降模式——先快后慢；并基于数学模型，预测HBV RNA转阴所需的中位时间为3.63年。.3. 证实血清HBV RNA和HBcrAg水平与停药后持续应答和临床治愈相关.本项目在一项前瞻性CHB患者NAs停药队列中证实：治疗结束时HBV RNA阴性且HBcrAg<4 lg U/mL的患者，其停药后4年内无肝炎复发，且HBsAg转阴率达10.4%，显著高于其他受试者（1.4%，P <0.001）。.4. 创建乙肝临床治愈预测模型.本项目依托我中心牵头的10175例乙肝长期随访队列，构建并验证了基于HBV RNA的乙肝临床治愈预测模型，c-index值为0.947（95% CI：0.886-1.000）。其中，高概率组（high-chance group）的5年累积乙肝治愈率可达19.3%，显著高于低概率组（low-chance group）（0.4%，p<0.001）。.科学意义：.以上科研成果进一步阐明了HBV RNA的作用机制及临床意义，为该新型生物学标志物在临床中的推广应用提供了更多循证医学证据。