hex1在深绿木霉耐受有机磷农药敌敌畏中的作用机理

木霉耐受有机磷农药特性是木霉修复农药污染土壤以及木霉作为生防真菌与化学农药协调使用的重要基础。然而，木霉耐受有机磷农药的机理至今未明。本研究拟在有机磷农药敌敌畏胁迫的深绿木霉差异蛋白质组学研究工作基础上，通过基因克隆和功能分析技术，深入揭示hex1基因对Woronin body形成和菌丝隔膜透性的影响；在敌敌畏的胁迫条件下研究木霉菌hex1表达与菌丝隔膜超微结构、Woronin body形成和电解质外渗变化的相关性；通过酵母双杂交技术，鉴定hex1调控表达的上、下游基因和网络结点基因，明确敌敌畏胁迫对该基因网络表达规律的影响。从而为全面揭示木霉菌耐受有机磷农药分子机理奠定基础，并为开发高效耐受有机磷农药的生防木霉资源提供重要理论依据。

木霉菌耐受有机磷农药特性是木霉菌修复农药污染土壤以及木霉菌作为生防真菌与化学农药协调使用的重要基础。然而，木霉菌耐受有机磷农药的机理至今未明。本研究综合运用基因功能分析、转录组学以及基因敲除等方法，深入揭示了hex1基因在木霉菌耐受敌敌畏过程中的作用，从而为全面揭示木霉菌耐受有机磷农药分子机理奠定基础，并为开发高效耐受有机磷农药的木霉菌资源提供重要理论依据。. 本研究首先对深绿木霉hex1基因进行了克隆及原核表达。然后通过gene walking技术获得hex1基因的两侧序列，以潮霉素和G418抗性基因为筛选标记分别构建了hex1基因敲除载体和互补载体，并筛选获得了hex1基因敲除子和互补子。结合对野生菌、敲除子和互补子的性状分析，确认了hex1在木霉菌耐受敌敌畏过程中发挥了重要作用。同时，构建了eGFP和hex1基因融合表达的载体，进一步准确定位了HEX1蛋白在木霉菌丝的横隔处表达。最后，利用RNA-Seq技术绘制了深绿木霉全基因组水平的转录图谱，分析了野生菌和敲除子在转录组水平的差异，鉴定出ABC transporters、Major facilitator superfamily、Cytochrome P450、Glutathione S-transferase等hex1参与调控下敌敌畏诱导木霉显著性上调表达的重要耐受性基因，表明hex1基因对深绿木霉耐受敌敌畏相关基因的调控发挥着重要作用。 . 综上所述，本研究明确了hex1是木霉菌耐受敌敌畏胁迫的重要基因。hex1调控木霉菌细胞跨膜系统和抗氧化胁迫系统相关基因的表达是提高木霉菌对敌敌畏耐受性的途径之一。hex1基因调控木霉菌多种代谢途径相关的基因网络将是全息化认识木霉菌耐受敌敌畏分子机理的重要切入点。