基于miRNA表达谱的多囊卵巢综合征中医证候生物标志物研究

Traditional Chinese medicine (TCM) syndrome is the premise and basis of syndrome differentiation and treatment. The criterion about the polycystic ovary syndrome (PCOS) TCM syndrome isn’t unified due to its complexity, and lacking of the objective and quantitive biomakers; therefore, the clinical research cannot be conducted furtherly. The objective of the project is to explore the scientific connotation of PCOS TCM syndrome using miRNA expression profiling technologies. The alteration rules of miRNA expression profiling are analyzed in serum , human follicular fluid and ovarian granulosa cells focusing on liver depression and phlegm dampness PCOS patients undergoing in vitro fertilization (IVF-ET). The research platform for ‘TCM syndrome- miRNA expression profiling’ are built to study the gene transcription profiling and transcription regulatory networks in those patients. The Biomarkers of different TCM syndrome in PCOS patients are ensured for clinical diagnosis by this project. The variation in miRNA expression profiling are also analyzed before and after using the Chinese Herbal Compound in order to clarify the targets and the mechanism. The expectations of this project are seeking for theoretical breakthrough in TCM syndrome genomics and transcriptional mechanism, applying to the Chinese Herbal Compound optimization, clinical efficiency evaluation, and drug development.

证候是辨证论治的前提与基础。由于PCOS病机复杂，缺乏客观定量的生物学指标，辨证标准至今尚未统一，不利于临床深入研究。本项目以挖掘PCOS证候实质为目标，采用系统生物学的方法对PCOS患者进行多层面生物学指标检测，从临床性激素、糖代谢、脂代谢、基因转录后miRNA调控等多个层面阐述PCOS不同证候的病理生理机制。以行体外受精-胚胎移植的肝郁证、痰湿证PCOS患者为切入点，运用miRNA组学技术结合生物信息学方法，对各组患者血清、卵泡液及卵巢颗粒细胞基因转录后miRNA调控网络进行全景式分析，在宏观和微观层面挖掘与疾病及证候相关的关键生物标志物，构建具有临床应用价值的生物标志物网络，提高PCOS证候诊断的敏感性和精确性。同时以痰湿证为切入点，通过以药测证进一步证实PCOS证候生物标志物的可信性，阐明中药复方的整体作用机制及作用靶点，为中药复方组方优化、疗效评估、药物开发提供实验依据。

中医药辨证论治在治疗改善PCOS 患者症状、降低其远期并发症风险中发挥着重要作用，但由于PCOS病机复杂，缺乏客观定量的生物学指标，辨证标准至今尚未统一，不利于临床深入研究。因此关于本病的证候标准化研究十分必要及迫切。痰湿内盛、肝郁气滞是医家公认的 PCOS主要病机，本项目以肝郁证、痰湿证为切入点，探讨PCOS 证候的客观化标准并评估经典方剂的疗效机制，以期有效提高PCOS的防治水平、阐明PCOS 证候的科学内涵。项目研究结果显示PCOS痰湿证具有T水平显著升高的生殖内分泌特征， FINS、HOMA-IR显著升高的糖代谢异常以及TG、LDL-C水平升高、HDL降低的脂代谢紊乱。PCOS肝郁证仅表现为LH水平显著升高。回归分析显示外周血T水平、FINS、TC、TG是PCOS 痰湿证的独立风险因素；而外周血LH水平是PCOS肝郁证的独立影响因素，HDL-C是PCOS肝郁证的保护因素。项目建立了PCOS 肝郁证、痰湿证血清、卵泡液及卵巢颗粒细胞miRNA 组学数据库，不同证候PCOS患者血清、卵泡液、颗粒细胞中多个miRNA异常表达，血清中miRNA-483-3p、miRNA-642a、miRNA-193、miRNA-2861等的异常表达是PCOS痰湿证的独立风险因素；血清中miRNA-146a的异常表达是PCOS肝郁证的独立风险因素。相关性分析显示卵泡液、颗粒细胞中多种miRNA的异常表达与PCOS痰湿证、肝郁证患者卵母细胞、胚胎质量等密切相关。项目构建的性激素、糖代谢、脂代谢生物标志物与miRNA 生物标志物的网络联系图谱可以很好的区分PCOS 痰湿证、肝郁证。应用燥湿化痰中药复方苍术导痰丸可显著改善PCOS性激素及糖、脂代谢异常，并调节外周血及卵巢局部miRNA的表达，从而改善PCOS痰湿证患者的助孕结局。而且部分miRNA在血清、卵泡液及颗粒细胞中表达趋势一致，通过检测外周血miRNA的表达变化结合利用痰湿证外周血标志物FINS、T、TG、TC等可以有效评价中药复方对PCOS痰湿证患者的整体治疗效果，并为中药复方组方优化、疗效评估、药物开发提供实验依据。本研究建立的量化、客观化的诊治评估标志物，可以更有效地指导临床并促进PCOS中医证候的临床深入研究和成果的进一步推广。