猪不同胚胎附植期子宫内膜特异表达基因筛选鉴定及对产仔数影响的研究

胚胎附植期是早期胚胎存活的关键时期，对母猪产仔数有重要影响。在胚胎附植前期，尤其是受精后9-13天，胚胎损失率为22%，妊娠18天时，胚胎死亡率为17%，24天胚胎死亡率上升到30%。因此减少胚胎附植期的胚胎死亡率是提高母猪产仔数的一个关键环节。本研究将选取未妊娠母猪，妊娠13天、18天和24天的母猪子宫内膜胚胎附植点和非附植点作为研究对象，利用表达谱芯片技术筛选未妊娠母猪与妊娠母猪胚胎附植前、中、后三个时期，子宫内膜附植点和非附植点特异表达的基因，采用免疫组化、原位杂交、Western杂交技术，分别从RNA水平和蛋白水平检测和验证差异基因的时空表达特异性，利用PCR-SSCP技术寻找与产仔数高度相关的SNP位点并确定优势基因型，综合分析特异基因在胚胎附植中的表达及其与产仔数的关系，探讨其遗传机制，这对减少母猪胚胎死亡率、提高母猪年生产力以及选育高产仔专门化母系具有重要意义。

猪胚胎附植时期的胚胎死亡率较高，减少胚胎附植期间的胚胎死亡对提高母猪产仔数非常重要。因此研究猪胚胎附植时期子宫内膜基因的表达变化规律，寻找对猪胚胎附植和产仔数有显著影响作用的基因，对更好的研究母猪妊娠早期胚胎成活率和提高母猪产仔数有重要意义。.本研究选取未妊娠母猪，以及胚胎附植前期（妊娠第13天）、中期（妊娠第18天）和后期（妊娠第24天）的大白猪作为研究对象，利用表达谱芯片杂交的方法筛选获得胚胎附植早、中、晚时期子宫内膜差异表达的基因：对整个附植期子宫内膜附植点基因的连续表达变化进行分析，得到了858个差异基因。对13天、18天和24天附植点和非附植点基因表达情况进行对比分析，得到12个、51个和89个差异基因。通过功能注释，得到了差异表达基因参与的生物学过程，主要有血管形成、蛋白水解、免疫反应和激素相关等。然后，通过将获得的差异基因物理位置与已知猪产仔数的 QTL区间进行比对，得到了87个与猪产仔数紧密相关的候选基因，这些基因不仅参与胚胎附植过程，而且在物理位置上也与产仔数的 QTL区间很近，提示这些基因通过影响胚胎附植过程进而对产仔数产生影响。.孕酮受体调节的信号通路对附植过程有着重要作用，并且表达谱芯片结果显示通路中各基因在附植过程中表达差异显著，我们通过RT-PCR和Western blot试验对通路中Ihh、COUP-TFII、Bmp2、Fkbp4、Hand2基因在附植时期的表达进行了mRNA和蛋白水平的检测。分析发现，Ihh基因mRNA和蛋白表达在整个附植时期上调表达，Bmp2基因mRNA和蛋白表达在附植前期表达显著上调，提示其对附植发挥重要作用。免疫组化结果显示，Ihh, COUP-TFII, Bmp2, Fkbp4, Hand2在子宫内膜腔上皮细胞，腺上皮细胞中均有较强阳性反应，COUP-TFII和Hand2在基质细胞中的表达也较强。.同时，我们对筛选到的产仔数候选基因：Ihh、COUP-TFII、Bmp2、Fkbp4、Hand2、Muc1进行了单核苷酸检测和多态与产仔数的关联分析，结果发现COUP-TFII基因的单核苷酸突变、Muc1基因的串联重复序列多态性等对母猪产仔数影响显著。.本研究筛选获得了对胚胎附植过程和产仔数有重要影响的基因，研究为进一步鉴定产仔数分子标记基因、提高母猪繁殖性能奠定了基础。