BLTA基因多态性位点rs1982809与严重创伤并发症易感性的临床关联和功能研究

With the improvement of traumatic emergency system of the first aid technique, the mortality of patients with severe trauma due to the trauma itself has significantly reduced. Severe trauma complications, such as sepsis and Multiple Organ Dysfunction Syndrome (MODS), cause a greater threat to human health. BTLA gene plays an important role in the immflamation and immune related diseases. Our previous studies have found that a 3’UTR single nucleotide polymorphism (SNP) of BTLA rs1982809 has close relationship with the morbidity of sepsis and MODS. Bioinformatics analysis suggests that this SNP may be a functional loci. In order to further clarify the functional significance of rs1982809, we attempt to reveal the influence of it on the expression level and stability of BTLA mRNA, or the combination of BTLA gene with miR-25, thus affecting the inflammatory balance, and ultimately affect the morbidity of trauma complications. This study was designed to demonstrate the functional significance of BTLA rs1982809 and clarify the mechanism of its impact on the outcome of the severe trauma patients. It will provide a new molecular marker for the early warning of complications of severe trauma patients.

随着创伤急救系统的不断完善和急救技术的不断改进，严重创伤病人因创伤本身即刻致死的死亡率已显著降低，创伤的严重并发症，如脓毒症及其引发的多器官功能障碍，对人类健康造成更大的威胁。BTLA基因与炎症和免疫反应密切相关，我们的前期研究发现，BTLA基因的3’UTR区突变rs1982809在贵州人群中与脓毒症和多器官功能衰竭发病率密切相关，生物信息学分析提示该位点可能是功能性位点。为深入研究其功能意义，本课题拟从rs1982809对BTLA mRNA表达水平/稳定性的影响，或影响BTLA基因与miR-25结合进而改变下游炎性因子的表达水平，从而影响炎症反应平衡，最终改变创伤并发症的发生发展这几个方面着手，系统深入的研究rs1982809影响创伤后并发症发生发展的机制。深入研究rs1982809影响严重创伤并发症发病率的分子机制，有望为脓毒症预警防治提供新的有效生物标志。

脓毒症一直是危重症领域的临床救治难点。B和T淋巴细胞衰减因子是近年来发现的一种抑制性受体，已被证实能抑制T细胞的活化和增殖。T淋巴细胞是脓毒症免疫调节的主要效应细胞，BTLA是反映脓毒症患者免疫状态的重要生物标志物。在本研究中，我们想要调查BTLA基因的遗传变异与严重创伤患者脓毒症和多器官功能衰竭发病率之间的关系及其作用机制。我们从BTLA基因中挑选出rs1982809、rs9288952和rs9288953作为标签单核苷酸多态性，并采用改进的多重连接检测反应对562例无血缘关系的严重创伤患者进行了基因分型。为进一步阐明其作用机制，我们构建了两个含有rs1982809 T或C等位基因的质粒，然后利用RT-qPCR技术及双荧光素酶报告基因检测测定了BTLA 3’-非翻译区的mRNA稳定性、BTLA 3'-UTR活性，用流式细胞分析技术分析了BTLA在T淋巴细胞上的表达情况。结果表明，在三个标记单核苷酸中，只有位于BTLA 3'-UTR区的rs1982809具有很强的临床相关性，表现为创伤患者C等位基因携带者脓毒症发病率和mods评分较高，免疫炎症反应较强。mRNA稳定性检测表明，rs1982809中T到C基因突变不影响BTLA信使核糖核酸的稳定性。rs1982809 CC携带者外周血BTLA+CD4+CD3+T淋巴细胞百分率明显低于TT携带者。我们进一步的研究发现，含有C等位基因的质粒转染的细胞荧光素酶活性低于T等位基因转染的细胞。因此，BTLA在T淋巴细胞上的差异表达可能是由于rs1982809 T/C的3'-UTR活性不同所致。因此我们得出结论，BTLA的rs1982809基因多态性不仅是评价脓毒症和MODs预后的有效临床生物标志物，而且是调控BTLA 3'-UTR活性和外周血T淋巴细胞上BTLA表达的功能性SNP。