减重术后胆汁酸对L细胞的影响及机制研究

The improvement of L cell secreting after bariatric surgery has been considered to be the mechanism for diabetes remission. Bile acid play an important role in cell proliferation, differentiation and signal transduction as a endogenous signal molecules. Our preliminary research found patients with diabetes showed increased bile acid and L cell secretory, and both were positive related, we speculate that bile acid play an important role in L cell secreting improved after bariatric surgery. We plan to study bariatric surgery animal model and L cell in vitro. The effect of bile acid on lipid metabolism, cell apoptosis and secretory level of L cell will be evaluated, the role of bile acid receptor FXR and expression of SREBP-1C are also be investigated. In this study, bile acid and L cell secretory are used as the breakthrough point to explore the mechanism of L cell secretory improved after bariatric surgery, it will provide a new target and theoretical basis for the prevention and treatment of type 2 diabetes.

减重手术后L细胞分泌的激素水平显著升高被认为是术后糖尿病改善的主要原因。胆汁酸作为一种内源性信号分子，在细胞的增殖、分化、细胞内信号转导中扮演了重要的角色。我们前期研究发现减重手术之后2型糖尿病患者的胆汁酸和L细胞分泌水平显著升高，两者成正相关，启示测胆汁酸对L细胞分泌功能在减重手术后的改善起到重要作用。本研究以减重手术动物模型和体外L细胞为研究对象，观察胆汁酸对L细胞内脂代谢、细胞凋亡及分泌水平的影响，并探讨胆汁酸受体FXR在其中的作用，同时研究SREBP-1C表达水平的变化，本研究以胆汁酸与L细胞分泌激素水平为切入点，探讨L细胞在减重手术后分泌功能改善的机制，为2型糖尿病的防治提供新靶点和理论基础。

近年来有研究发现，2型糖尿病的肥胖症病人实施减重手术后糖尿病症状能得到显著缓解，可能与胆汁酸和L细胞分泌功能的改善有关。针对这一临床现象，我们以减重手术动物模型和肠内分泌L细胞为研究对象，对手术后II型糖尿病缓解的作用机制展开了研究。其主要研究内容与结果如下：.1、成功建立了肥胖糖尿病大鼠手术模型，其中实施减重手术组的大鼠血清中胆汁酸和GLP-1的含量均显著高于对照组，表明胆汁酸与GLP-1的分泌可能与术后II型糖尿病缓解有关。.2、利用GW4064、si-FXR干扰片段、FXR过表达质粒转染肠内分泌L细胞，评价了FXR对GLP-1分泌的影响。结果显示，GW4064处理能显著提高GLP-1的分泌，而FXR的过表达能降低GLP-1的分泌，表明FXR可抑制GLP-1的分泌。.3、通过BioGRID数据库与KEGG京都大学通路分析，筛选参与糖原信号通路的FXR互作蛋白，而后对比得到对GLP – 1分泌影响最显著的互作蛋白CREB。.4、验证FXR与CREB蛋白存在相互作用。GST pull-down结果显示，FXR-GST实验组中能检测出CREB-His蛋白，而GST实验组中不能检测出CREB-His蛋白；Co-IP结果显示，单独转染Myc-CREB不能被Flag抗体沉淀下来，而共转染myc-CREB与flag-FXR，Myc-CREB可被Flag抗体沉淀下来，表明FXR与CREB蛋白存在相互作用。.5、通过荧光素酶报告基因法、FXR表达干扰或过表达处理、cAMP-CREB通路激活处理探讨了FXR、CREB、GLP-1三者之间的关系。结果显示，CREB蛋白能与CRE基因结合从而促进其转录，导致荧光蛋白酶被转录翻译；FXR过表达与Forskolin处理不影响CREB的表达，但影响其下游基因PCSK1表达；当FXR过表达时，PCSK1 表达与GLP-1分泌受到抑制，而加入Forskolin处理后，PCSK1表达与GLP-1分泌升高。上述结果表明，FXR能与CREB蛋白结合形成复合物，解离共激活因子，从而抑制CREB对下游基因PCSK1的表达，进而抑制GLP-1的分泌。.本课题着重研究了胆汁酸受体FXR在调控肠内分泌L细胞分泌的分子作用机制，可为2型糖尿病的防治提供一定的理论指导作用。