基于“肾主骨”研究电针抗类风湿关节炎骨破坏的VIP分子调节机制

Traditional Chinese medicine believes that the "kidney deficiency" is the main pathogenesis of Rheumatoid arthritis(RA）. Clinically, RA probably leads to disability because of the bone destruction in the advanced stage,which seriously threatens people’s health. The pre-studies of our study group have shown that electroacupuncture (Shenshu, Xuanzhong and Zusanli) increases the vasoactive intestinal peptide (VIP) protein expressionin in both synovial tissue and serum, as well as significantly inhibited the local swelling, inflammatory cell infiltration, synovial cells and fibroblast proliferation of the RA joint. Under the guidance of "the kidney in charge of the bone"theory, combining the previous research and the fact that "kidney" regulates nerve-endocrine-immune and bone metabolism network, we put forward the hypothesis: electroacupuncture (EA) may have the biological effects on anti-RA bone destruction through regulating the balance of osteoblasts and osteoclasts by VIP. This study will observe the effects of EA on kidney-deficiency collagen induced arthritis rats and RA patients by animal studies, and further to explore the effects of VIP and its receptors on bone destruction, bone repair protein and related gene expression and functions, through pathological, imaging and molecular biology techniques, clarify the regulatory role of VIP and its receptor in the balance reconstruction of bone. The findings will clarify the modern medical connotation of “the kidney in charge of the bone” theory, provide a guidance for RA clinical treatment with acupuncture and a new theoretical basis for VIP targeted treatment in RA.

类风湿性关节炎（RA）主要病机是肾虚，临床上，RA后期因骨破坏导致高致残率，严重威胁人类健康。课题组前期研究表明，电针（肾俞、悬钟、足三里穴）干预可上调滑膜组织和血清中血管活性肠肽（VIP）的蛋白表达，显著抑制关节炎动物模型的关节炎症和系统性炎症。以“肾主骨”为理论指导，在前期研究基础上，结合“肾”对神经-内分泌-免疫-骨代谢网络的调控作用，进一步提出假说：电针干预可能通过VIP影响成骨细胞和破骨细胞的骨平衡而发挥抗RA骨破坏的生物学效应。本研究拟运用电针（穴位同上）干预肾虚型胶原性关节炎大鼠模型，采用组织病理、影像学及分子生物学等技术，深入研究并比较VIP及其受体对RA的骨破坏与骨修复、DKK1、RANK、RANKL及OPG蛋白及相关基因表达的影响,阐明VIP及其受体在骨平衡重建中的调节作用，指导针灸临床治疗RA，并为靶向VIP治疗RA提供新的理论依据。

类风湿性关节炎（RA）主要病机是肾虚，临床上，RA后期因骨破坏导致高致残率，严重威胁人类健康。骨破坏其发生机制为在 TNF-α、IL-1、IL-6等免疫炎症因子存在的条件下，Wnt-DKK 与 OPG-RANKL 两个系统相互作用直接影响成骨细胞与破骨细胞在关节组织中的平衡，导致破骨细胞异常活化，引起骨量丢失，骨破坏发生，进而导致关节间隙狭窄、变形。课题组以“肾主骨”为理论指导，在前期研究基础上，结合“肾”对神经-内分泌-免疫-骨代谢网络的调控作用，采用CIA动物模型为研究对象，对电针抗骨破坏的生物学效应及其VIP调节滑膜组织骨吸收和骨形成的关键蛋白和基因的分子机制进行对比研究，初步阐释电针调节骨平衡效应的关键所在。.在电针抗骨破坏的效应研究中，将实验大鼠分为生理盐水对照组（N组）、CIA模型（假手术）组（M组）、肾虚CIA模型组(C组)、电针（肾俞、悬钟、足三里）+肾虚CIA组 （T组），电针（血海、三阴交、足三里）+肾虚CIA组（U组），非穴位电针组（V组）。Mankin’s 评分结果：T组（5.43±1.63）关节软骨破坏较M、C、U、V组均有显著改善（P＜0.05），T、U、V组与M组相比，差异据统计学意义。结果提示，电针具保护软骨作用，电针肾俞+足三里软骨保护作用更为显著。该结果提示临床上，RA早期患者未出现骨破坏时，采用肾俞、足三里配穴电针法，可保护软骨，减轻、延缓骨破坏的发生。.电针抗骨破坏作用的VIP分子机制，及作用通路研究中，大鼠分为生理盐水对照组（A组）、肾虚CIA模型（B组）、电针+肾虚CIA组（C组）、电针+肾虚CIA+VPAC阻断组（D组）、VPAC阻断+肾虚CIA组（E组）、VIP+肾虚CIA组（E组）。 Western blot结果：阻断Wnt/β-catenin信号通路、抑制骨形成的DKK-1在VPAC阻断+肾虚CIA组（E组），肾虚CIA模型（B组）、电针+肾虚CIA+VPAC阻断组（D组）可见高表达，RANK与其配体表达趋势相似，在VIP激动剂干预组、电针干预组及生理盐水组，呈现低表达，从而刺激成骨细胞增生，减少破骨细胞分化增殖。RT-PCR结果与Western blot相符，提示电针是通过血管活性肠肽（VIP）的作用，调控RANKL/RANK/OPG系统。