基于Rho/ROCK信号通路的华蟾素注射液及其组分致血管刺激性反应机制的研究

Cinobufacini injection is widely used for a variety of advanced tumors in clinic, but various adverse reactions especially vascular irritation reactions are induced in the process of drug use, which could produce crtain constraints on its clinical use. Vascular hyperpermeability or vascular leakage is the main pathological mechanism of drug-induced vascular irritation reactions. In preliminary studies, the major vascular stimulating substances of Cinobufacini injection screening results showed that Cinobufacini injection and three tryptamine ingredients serotonin, bufotenidine, bufotenine could lead to significant vascular hyperpermeability. This project will use rabbits vascular irritation reaction models and mice vascular hyperpermeability models in vivo and vascular endothelial cell transwell chamber culture models in vitro to illuminate the molecular mechanisms that Rho/ROCK signaling pathway influenced the Cinobufacini injection-induced vascular irritation reactions through two directions of forward activating and reverse inhibition. The project could provide the basis for prediction and prevention of Cinobufacini injection-induced Vascular irritation reactions.

华蟾素注射液在临床上广泛用于多种中晚期肿瘤，但在临床使用中存在多种不良反应，其中血管刺激性反应较为严重，对其临床使用产生一定的制约。血管通透性增高或血管渗出是药物引起血管刺激反应的主要病理机制。前期研究中，对华蟾素注射液主要血管刺激物质进行了筛选，结果表明华蟾素注射液，5-羟色胺、蟾蜍特尼定、蟾蜍色胺三种色胺类成分都能导致显著可的血管通透性增高。本项目拟在前期工作基础上，进一步采用兔血管刺激性反应模型、小鼠血管通透性增高模型和体外血管内皮细胞transwell chamber培养模型相结合，通过正向激活、反向抑制两个方向共同阐明Rho/ROCK信号通路在华蟾素注射液诱导的血管刺激性反应中的作用及分子机制，为其血管刺激性作用的防治提供基础依据。

华蟾素注射液具有清热解毒、利水消肿、化瘀溃坚等作用，目前在临床上广泛用于多种中晚期肿瘤，如原发性肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌等恶性肿瘤的治疗。但在临床使用中存在多种不良反应，其中血管刺激性反应较为严重，对其临床使用产生一定的制约。血管通透性增高或血管渗出是药物引起血管刺激反应的主要病理机制。本课题旨在揭示华蟾素注射液及其组分引起血管刺激性反应的分子机制，为临床预防和治疗华蟾素注射液用药过程中导致的血管刺激性反应提供理论基础。课题首先采用兔血管刺激性反应模型、小鼠血管通透性增高模型，结果提示华蟾素注射液及其组分能够剂量依赖性地引起兔血管刺激性反应及小鼠血管通透性增高。接着在动物实验水平发现华蟾素注射液及其组分激活Rho/ROCK信号通路，而后在细胞水平通过激活、抑制Rho/ROCK信号通路论证华蟾素注射液通过Rho/ROCK信号通路改变HUVEC细胞骨架结构和单层通透性。最后使用Rho/ROCK信号通路抑制剂法舒地尔处理动物，发现抑制Rho/ROCK信号通路确实能降低华蟾素注射液诱导的小鼠血管通透性增高。本课题从体内、体外两方面均揭示了华蟾素注射液及其组分通过Rho/ROCK信号通路诱导血管或者内皮细胞通透性增高的分子机制，提示了法舒地尔临床用于预防华蟾素血管刺激性反应的可能性，为中药注射剂临床安全用药提供理论基础。