Tip60在oxLDL诱导的血管平滑肌细胞自噬及增殖中的作用机制

oxLDL-induced VSMC autophagy and proliferation plays critical role in atherogenesis. It has been reported that oxLDL can induce VSMC autophagy and proliferation, but the mechanism of autophagy-mediated VSMC proliferation in atherogenesis is largely unknown. We found that oxLDL can promote VSMC proliferation in autophagy-dependent manner. And knockdown of Tip60 is able to inhibite the oxLDL-induced autophagy and proliferation. Meanwhile, the oxLDL also can phosphorylate Tip60 and enhance the Tip60-Atg9 interaction. Thus, it is reasonable to expect Tip60 phosphorylation could mediate the oxLDL-induced VSMC autophagy, proliferation and atherogenesis. In this project, we will identify the oxLDL-induced exact Tip60 phosphorylation sites and the effect of Tip60 phophorylation on Atg9 acetylation and transport. Furthmore, we will also illuminate the role of Tip60 in VSMC autophagy, proliferation and atherogenesis, and comfirm the Tip60-mediated atherosclerosis mechanism on mice model. All these will enable us to know more about how Tip60 regulates VSMC autophagy and proliferation, also provide a new theoretical basis for the treatment of atherosclerosis by targeting Tip60.

血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMC）的自噬和增殖在动脉粥样硬化发生发展中起着重要作用。研究表明，氧化低密度脂蛋白oxLDL可以诱导VSMC自噬及增殖，但分子机制及其在动脉粥样硬化中的作用仍不清楚。我们前期研究发现，oxLDL以自噬依赖的方式诱导VSMC增殖；沉默VSMC中Tip60表达水平后，oxLDL诱导的VSMC自噬及增殖随之被抑制。oxLDL能诱导Tip60磷酸化并增强其与Atg9的结合。这些结果揭示，Tip60的磷酸化可能介导了oxLDL诱导的VSMC自噬、增殖。因此，我们拟通过进一步研究，明确oxLDL诱导Tip60磷酸化的精确位点及其对自噬基因Atg9乙酰化、转运的影响，阐明Tip60在VSMC自噬和增殖中的作用，同时在小鼠水平上证实Tip60对动脉粥样硬化的发生和发展的调节作用，以丰富我们对调控动脉粥样硬化分子网络的认识。

血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMC）的自噬和增殖在动脉粥样硬化发生发展中起着重要作用。溶血磷脂胆碱（Lysophosphatidylcholine，LysoPC）则是诱导动脉粥样硬化发生的元凶——氧化低密度脂蛋白（Oxidized low density lipoprotein，oxLDL）中最主要成分。我们的研究初步阐明了在人冠状动脉平滑肌细胞中，离子通道蛋白TRPC1与TRPC3通过相互作用形成异源二聚体，并可被LysoPC激活并介导的Ca2+的内流，进而上调促凋亡蛋白Bax表达、Caspase-3剪切，并下调抗凋亡蛋白Bcl-2和p-Akt的表达，从而诱导HCASMCs的凋亡。阻断细胞内TRPC1或TRPC3表达将阻断lysoPC诱导的Ca2+内流和细胞凋亡，可作为潜在的治疗动脉粥样硬化的药物靶点。此外，本项目还同时对特异性诱导细胞自噬的小分子化合物THPN（1-(3,4,5-trihydroxyphenyl)nonan-1-one）进行深入研究，我们发现在THPN诱导下，Akt2可特异地磷酸化TR3的一个全新位点S533，进而诱导了HeLa细胞内TR3-Nix结合、线粒体膜电位去极化和细胞自噬性死亡。当TR3 S533点突变为非磷酸化状态的TR3 S533A后，THPN则失去了上述生物学功能。究其原因在于，Akt2对TR3 S533位点的磷酸化，使得TR3滞留于细胞核中，不能转运到细胞浆进而无法与Nix结合，也无法诱导LC3-II表达升高，最终阻断了THPN所诱导的自噬性死亡相关生物学功能。我们的研究不仅阐明了THPN特异性诱导细胞自噬性死亡的分子机制，也为后续利用Akt2抑制剂扩大临床肿瘤治疗药物的应用范围提供了理论基础。