吸入NO诱导移植EPC归巢防治支气管肺发育不良的研究

基于支气管肺发育不良（BPD）发生的"血管假说"，促进肺血管发育的治疗策略有望成为有前景的BPD防治手段。内皮祖细胞（EPC）是血管内皮前体细胞。循环EPC在肺部疾病发病机理和治疗上的潜在作用近年已受到重视，但在新生肺疾病的研究非常少。本项目拟建立高氧暴露早产大鼠BPD模型，予静脉输入体外分离培养和示踪标记的EPC，采用激光共聚焦、肺组织形态测定分析、流式细胞术、荧光定量RT-PCR和Western blot等方法，研究循环EPC水平和肺内内皮型一氧化氮合酶/一氧化氮（eNOS/NO）信号介导的EPC归巢异常，与BPD发生的关系；以及外源性吸入NO诱导移植EPC归巢策略对肺内血管和肺泡发育的影响，从而阐明循环EPC水平及eNOS/NO信号介导的EPC归巢异常是BPD发生的重要机制，并进一步证实吸入NO诱导移植EPC归巢可促进肺内血管和肺泡发育，为发展BPD防治新策略提供全新思路和实践依据。

内皮祖细胞（EPC）是血管内皮前体细胞，循环EPC 在肺部疾病发病机理和治疗上的潜在作用近年已受到重视。吸入一氧化氮（iNO）治疗是近几年临床BPD防治研究的热点。本项目旨在探讨循环EPC 水平在BPD 发生的作用及其重要机制，并进一步证实吸入NO 诱导移植EPC 归巢可促进肺内血管和肺泡发育，为发展BPD 防治新策略提供全新思路和实践依据。在临床研究中，我们纳入了60例胎龄小于32周、出生体重小于1500克的早产儿，其中25例BPD，35例非BPD。结果显示，BPD患儿生后7天，21天循环EPC水平明显低于非BPD患儿。同时，BPD患儿从出生至生后21天血清VEGF水平持续低于非BPD患儿。两者患儿生后28天和纠正胎龄36周循环EPC水平无显著差异。另外，发现吸入NO提升了BPD患儿循环EPC数目，同时伴随血清VEGF的升高。 研究证实生后循环EPC水平降低与BPD发生存在相关性，吸入NO能增加外周血EPC水平和VEGF水平。动物实验中，我们建立了高氧暴露新生大鼠高氧肺损伤模型，予静脉输入体外分离培养和示踪标记的EPC，研究联合iNO和EPC移植对高氧暴露新生大鼠肺泡结构和肺内血管发育的影响。结果发现，新生大鼠高氧暴露导致肺泡结构简化，肺内微血管减少，肺组织VEGF和eNOS表达降低。移植的EPC能定植于肺，肺内微血管增加，肺组织VEGF和eNOS表达上调。EPC移植联合iNO治疗，明显增加了循环EPC数目，增加了移植EPC在肺组织的定植，改善了肺泡和微血管数目，伴随VEGF和eNOS表达上调。研究证实，高氧暴露可以破坏新生鼠肺泡和肺血管的发育；外周静脉移植EPCs可以归巢至肺，促进肺损伤的修复；同时吸入NO，可进一步增加移植EPCs归巢和定植，改善肺结构。