ABIN1/A20介导的C/EBPβ信号通路调节在SLE自身免疫炎症形成中的作用及机制研究

Recognition of self nucleic acids by TLR7/9 is the key step in the pathogenesis of SLE and hampers glucocorticoid activity in lupus. C/EBPβ in the downstream of TLR-MyD88 is a novel ,important inflammatory factor regulated by ABIN1(A20 binding inhibitor of NF-κB)which is a susceptible gene for SLE,but the regulatory mechanism is not clear.A20 is another susceptible gene for SLE and can turning off inflammation signal by inhibit NF-κB,while whether it affects C/EBPβ signal or not is still unkown.So it is necessary to study the role of ABIN1/A20 on C/EBPβ signal pathway,and further clarify the mechanism of SLE autoimmune inflammation.In this study,we will take westerning blot,IP,RNAi,haploid-mutation and other methods to explore how ABIN1 and A20 regulate C/EBPβ pathway,which may provide new clue or target for SLE therapy.

TLR识别自身核酸是启动自身免疫炎症反应的关键步骤，也是造成SLE患者对糖皮质激素治疗不敏感的重要原因。TLR-MyD88介导的信号通路C/EBPβ是新发现受SLE易感基因ABIN1调控的重要炎症通路，ABIN1对C/EBPβ通路的调节在SLE的发病中具有至关重要的作用，但是其机制尚不清楚。ABIN1的相互作用蛋白A2O也是SLE的易感基因，它对TLR的经典信号通路NF-kB、MAPK具有强烈的抑制作用甚至是关闭作用，但它是否参与对C/EBPβ信号通路调节也不清楚。因此，阐明ABIN1/A20对C/EBPβ信号的调节作用，对明确SLE免疫炎症形成机制具有重要价值。本课题拟通过RNA干扰和突变体构建研究ABIN1/A20对C/EBPβ信号通路的作用和可能的分子机制，并通过免疫共沉淀技术研究ABIN1和A20是否协同作用，有望为提高SLE治疗效果减少激素用量和药物毒副作用提供新的靶点和线索。

本文采用定量PCR和western blot检测SLE患者和正常对照者外周血单一核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）中C/EBPβ、TNFAIP3和TNIP1 mRNA和蛋白的表达，并分析了C/EBPβ mRNA表达与疾病活动度以及与TNFAIP3/TNIP1 mRNA表达的相关性。结果发现C/EBPβ mRNA在SLE患者PBMC中的表达量较正常对照组显著增高，与TNFAIP3和TNIP1 mRNA的表达呈正相关，提示C/EBPβ对TNIP1/TNFAIP3的转录有增强作用。病例组组间比较发现，C/EBPβ mRNA在高ANA滴度(≥1:160)、抗Sm抗体阳性及抗nRNP抗体阳性患者PBMC中的表达量显著增高，其表达量与疾病活动度SLEDAI评分呈正相关，与患者补体C3、C4水平呈显著负相关。而进一步比较发现，SLE患者PBMC中表达升高的是C/EBPβ 的功能性蛋白LAP，而其抑制性蛋白 LIP表达水平较正常对照降低，提示C/EBPβ蛋白表达量与SLE疾病严重程度有关，有可能成为反应疾病活动度的指标。同时，SLE患者PBMC中C/EBPβ功能性蛋白LAP表达升高，抑制性蛋白LIP表达降低，提示C/EBPβ可能参与SLE的发病过程。本文进一步检测了用SLE患者和正常对照血浆刺激单核巨噬细胞后C/EBPβ mRNA和蛋白的表达变化，结果发现，SLE患者血浆刺激组较正常对照血浆刺激组C/EBPβ mRNA及蛋白LAP表达较正常对照增高显著增高；而C/EBPβ LIP蛋白表达无明显差异，提示SLE患者血浆可以诱导单核巨噬细胞C/EBPβ功能性表达。最后，分别通过siRNA和慢病毒感染干扰TNFAIP3和TNIP1表达，用Q-PCR和WB检测C/EBPβ蛋白表达水平的变化，结果发现， C/EBPβ LAP蛋白表达明显升高，提示抑制TNIP1和TNFAIP3蛋白表达可以诱导C/EBPβ功能性表达。