Dishevelled-3上调p120ctn影响肺癌细胞侵袭转移的的分子机制

Dishevelled(Dvl)上调p120ctn转录的机制尚无报道。我们发现转染Dvl-1或3均可增强肺癌细胞的侵袭能力，但只有转染Dvl-3能够上调p120ctn的mRNA转录水平，同时上调转录因子Pax6，而p120ctn启动子区内存在着Pax6、SP1等转录因子的结合位点。我们推测Dvl-3可能是通过激活转录因子Pax6或抑制SP1等促进p120ctn转录的。本研究拟构建和转染Dvl-3、Pax6质粒，合成和转染siRNA-Pax6和siRNA-SP1等进行双向和单向调控，应用染色质免疫共沉淀（ChIP）、报告基因系统及real-time PCR等方法检测Pax6等是否能与p120ctn启动子区结合，以及这种结合对p120ctn转录的影响，阐明Dvl-3上调p120ctn转录的具体机制，研究将丰富Wnt通路与黏附分子p120ctn的关系，为防治肺癌提供新的靶点。

Dishevelled-3 (Dvl-3) 和 p120-catenin (p120ctn)在非小细胞肺癌细胞中异常表达并与不良预后相关, Dvl-3能够上调非小细胞肺癌中p120ctn的表达，但具体的调控机制还不清楚。向A549和LTEP-α-2 (LTE)肺癌细胞中转染Dvl-3表达质粒后,p120ctn的mRNA和蛋白表达均明显升高，同时细胞的增殖和侵袭能力明显增强。转染Dvl-3可上调p38和转录因子p65的表达和活化，使IκB-α磷酸化以及p65入核增加。染色质免疫共沉淀结果发现p65与PAX2启动子区结合增加，使PAX2的表达增强，被上调的PAX2与p120ctn启动子区的结合增强而促进p120ctn的转录；而加入p38抑制剂SB203580后，p-IκB-α下调，p65的入核水平减少，PAX2和p120ctn的表达水平不再上调，细胞的增殖和侵袭能力也不被增强。转染Dvl-3并加入IκB-α活性抑制剂BAY11-7082后，p65的入核减少，PAX2与p120ctn启动子区的结合减少，同时p120ctn的表达下调；共转染Dvl-3和 siRNA-PAX2，则 p120ctn的表达水平不能被上调。另外，转染Dvl-3后，Sp1与p65出现明显的结合，从而减少与p120ctn启动子区的结合。总之, 我们的研究发现Dvl-3通过p38活化p65上调p120ctn转录并促进NSCLC增殖和侵袭。