昆虫脂肪体细胞建系方法及其成系机制研究

本研究以甜菜夜蛾幼虫脂肪体细胞的原代培养为实验模型，借鉴哺乳动物细胞增殖及永生化分子机理的研究，从整体、细胞、分子水平三个层次，比较研究昆虫细胞在体内和体外的差异，探讨昆虫细胞系的建立方法，阐明决定昆虫细胞成系的关键因子和分子机制。主要包括：细胞从组织中分离和增殖的诱导，增殖细胞DNA的标记，染色体端粒的变化和端粒酶的活性，染色体数目和倍性的改变等。

在甜菜夜蛾原代细胞和细胞系中筛选出的198个unique基因中，原癌基因和泛素通路相关基因起主导作用，进一步通过Real-time PCR验证发现，在细胞成系过程中，这些原癌基因和泛素通路相关基因的表达都发生了显著变化，提示这些基因在甜菜夜蛾细胞成系过程中发挥了重要作用。. 在对甜菜夜蛾端粒酶的研究中发现，不仅在甜菜夜蛾幼虫的多种组织中高活性表达端粒酶，并且采用延伸(TTAGG)n端粒模式。该端粒酶全长2200bp，不含内含子，是昆虫家族中第一个获得的有活性的端粒酶基因序列。研究结果推翻了前人（Mizuko and Kenji, 2006）所述端粒酶GQ基团遗失是导致家蚕端粒酶活性丧失的可能原因的结论。甜菜夜蛾端粒酶基因序列的获得，为通过转基因的方法快速建立昆虫细胞系提供了方法和工具。