N-乙酰基半乳糖胺转移酶10调控黏蛋白18的O-糖基化参与肾癌舒尼替尼治疗抵抗的机制研究

Multikinase inhibitor sunitinib could significantly improve the survival of patients with metastatic renal cell carcinoma, while drug resistance is a severe challenge in clinical treatment. The applicant has investigated that epigenetic regulatory protein EZH2 (BJU I 2016) and SETD2 (J Urol 2016) play important roles in renal cell carcinoma progression and therapy resistance. Further studies have shown that high expression of GALNT10 in tumor tissue indicates poor postoperative survival and sunitinib therapeutic benefit (Oncotarget 2017). GALNT10 expression is negatively correlated with MUC18. Interfering GALNT10 expression could inhibit P53 activity via MUC18 O-glycosylation . The aim of this project is to further elucidate the mechanism and significance of sunitinib therapy resistance for GALNT10 induced MUC18 O-glycosylation and inhibited P53 activity signaling pathway. Establish a molecular regulation and intervention model for the expression of GALNT10 in renal cell carcinoma to promote the sunitinib therapy resistance, and lay the foundation for exploring the strategy of reversing sunitinib therapy resistance.

多激酶抑制剂舒尼替尼可以显著改善晚期转移性肾癌患者的生存，然而迅速出现的药物抵抗是临床治疗中面临的突出问题。项目申请人前期研究发现表观遗传调控蛋白EZH2（BJU Int 2016）和SETD2（J Urol 2016）在促进肾癌进展和治疗抵抗中的关键作用。进一步研究发现肾癌患者肿瘤组织中N-乙酰基半乳糖胺转移酶GALNT10高表达提示患者不良术后生存和较差舒尼替尼治疗获益（Oncotarget 2017），其表达水平与MUC18表达呈显著负相关，干扰GALNT10表达可影响MUC18的表达和P53的活性。本项目申请拟在前期发现基础上，分析肾癌细胞GALNT10表达介导MUC18的O-GalNAc糖基化修饰抑制P53信号促进细胞存活的分子机制及其参与舒尼替尼治疗抵抗的功能意义，建立肾癌细胞GALNT10表达促进舒尼替尼治疗抵抗的分子调控和干预模型，为探索逆转舒尼替尼治疗抵抗的策略奠定基础。

背景：TKI药物是治疗转移性肾癌（mRCC）患者的重要手段之一，探索判断预后的生物标志物及TKI耐药的机制一直是研究的重点。随着肾癌免疫治疗时代的开启，越来越多的研究证据表明，肿瘤微环境（TME）对于肿瘤的发生发展及耐药起着关键性作用。.研究内容：我们制作了肾癌患者组织芯片以及服用靶向药物的转移性肾癌患者组织芯片并通过免疫组化对肾癌患者肿瘤组织进行染色来研究肿瘤浸润中性粒细胞，T细胞等表达情况。通过流式细胞技术研究新鲜肾癌组织样本的表达。.结果：我们对使用TKI的患者组和细胞因子治疗的患者组进行生存分析，发现TKI组中TINs的存在与较短的OS相关（p=0.004）。我们通过TCGA数据库分析发现，TINs含量较高的RCC中CD8+T相关基因表达显著下调，TINs低表达的肿瘤组中CD8+T浸润程度明显高于TINs高表达的组（p<0.001），免疫组化结果也提示TINs存在的肿瘤组中CD8+T细胞数量明显少于TINs缺失的肿瘤组。我们进一步分析了CD39+CD8+T细胞在肾癌中的临床价值发现CD39+CD8+T细胞高表达组患者的总体生存期和无复发生存期显著较差且此组患者对TKI药物治疗具有更好的反应性（p=0.015），同时发现发现高浸润CD39+CD8+T 细胞组患者组织中 VEGFA+细胞数目显著增多（p＜0.01），提示TINs及肿瘤浸润CD39+CD8+T细胞可作为转移性肾癌靶向治疗的生物标志物。