基于骨髓微环境调控探讨丹红注射液动员内皮祖细胞的药效物质及分子机制

Myocardial injury repair is the key process of prevention and treatment of ischemic heart disease. Bone marrow derived EPCs has effect on promoting Pathological angiogenesis, repairing myocardial injury. EPCs mobilization from bone marrow to peripheral blood is the starting link of treatment of ischemic heart disease. Our early clinical research have shown that Danhong Injection play an important role in promoting EPCs mobilization, but the pharmacodynamic material and molecular mechanism is unclear. EPCs mobilization is closely related to signaling transduction induced by the change of bone marrow microenvironment, which include activating eNOS/MMP-9 /SCF/c-Kit and suppressing or blocking SDF-1/CXCR4 and Integrin-α4/VCAM-1 and induce EPCs detaching from bone marrow microenvironment to circulation. We will establish the bone marrow of GFP transgenic mice transplantation combined MI model mice to investigate the effect on EPCs mobilization and the influence on bone marrow microenvironment regulation by using flow cytometry analysis, immunohistochemical, RT-PCR and western blotting, so as to clarify the pharmacodynamic material and mechanism of Danhong injection mobilizing EPCs and provide scientific basis for Danhong injection clinical application in preliminary.

心肌损伤修复是缺血性心脏病防治的关键，骨髓来源的EPCs具有促进病理性血管新生、修复心肌损伤的作用。EPCs从骨髓动员至外周血是其参与治疗缺血性心脏病的始动环节。课题组前期临床研究表明丹红注射液具有EPCs动员的作用，其药效物质基础及分子作用机制尚不清楚。EPCs动员与骨髓微环境改变引起的信号通路转导密切相关，包括激活骨髓中eNOS/MMP-9/SCF/c-Kit、下调或阻断SDF-1/CXCR4和Integrin-α4/VCAM-1信号通路，诱导EPCs脱离骨髓微环境进入血循环。本研究拟建立GFP骨髓移植+MI小鼠模型，应用流式细胞分析、免疫组化、RT-PCR、蛋白免疫印迹等方法考察丹红注射液及其所含化合物动员EPCs的作用及对骨髓微环境调控的影响，以阐明丹红注射液动员EPCs的药效物质及分子机制，为临床用药提供科学依据。

骨髓来源的EPCs具有促进病理性血管新生、修复心肌损伤的作用。EPCs从骨髓动员至外周血是其参与治疗缺血性心脏病的始动环节。课题组前期临床研究表明丹红注射液具有EPCs动员的作用，其药效物质基础及分子作用机制尚不清楚。本研究建立了GFP骨髓移植+MI小鼠模型，应用流式细胞分析、免疫组化、RT-PCR、蛋白免疫印迹等方法考察丹红注射液及其所含化合物动员EPCs的作用及对骨髓微环境调控的影响，以阐明丹红注射液动员EPCs的药效物质及分子机制，为临床用药提供科学依据。本研究初步揭示了丹红注射液动员EPCs的药效物质为丹酚酸D、紫草酸、丹酚酸A、丹酚酸B、丹参素，以上化合物发挥作用的时间不同，在动员早期为丹酚酸D、紫草酸，动员后期为丹酚酸A、丹酚酸B、丹参素。初步阐明了DHI经骨髓微环境调控动员EPCs分子作用机制，动员早期DHI、SaD、LA可以通过上调Akt/eNOS/MMP-9的表达从而促进EPCs动员，而动员后期DHI、DSS、SaB、SaA主要通过激活eNOS/MMP-9/SCF及抑制Integrin-α4/VCAM-1促进EPCs动员。研究结果表明DHI、DSS、SaB、SaA通过增强EPCs动员，可以抑制心肌纤维化、抑制心肌细胞凋亡、增加毛细血管密度等，从而促进缺血心肌损伤修复、改善心功能。