霍乱弧菌分型噬菌体VP3的裂解机制研究

霍乱是一种急性肠道传染病，目前的霍乱世界大流行由O1群的El Tor型霍乱弧菌引起。中国使用噬菌体-生物分型方案对El Tor型菌株分型，菌株对分型噬菌体的敏感性与其致病性和流行能力呈高度一致性。研究分型噬菌体的裂解机制，将有助于深入理解El Tor菌株流行株和非流行株的遗传差异；筛选能导致霍乱弧菌裂解的噬菌体蛋白，将为霍乱的治疗和控制提供新思路。噬菌体感染晚期宿主菌裂解释放子代噬菌体，这是噬菌体生命周期的重要阶段，在基础研究方面具有重要意义。VP3是五种分型噬菌体之一。本研究从VP3基因组分析入手，通过蛋白表达和活性分析，明确预测的裂解相关基因在霍乱弧菌内表达是否导致菌体裂解；检验重组蛋白体外裂解对VP3敏感的霍乱弧菌的能力，并研究重组蛋白对其它不同型别霍乱弧菌的裂解能力。本研究将阐述VP3噬菌体感染后期，宿主菌裂解、噬菌体被释放的机制，并研究VP3裂解相关蛋白的裂解谱。

霍乱是一种急性腹泻，属于我国甲类法定传染病。噬菌体VP3是霍乱弧菌O1血清群El Tor生物型的烈性噬菌体，分离自1966年，之后在中国被用于El Tor型霍乱弧菌的噬菌体分型。本研究从VP3的基因组入手，拟通过蛋白表达和蛋白活性分析，研究VP3的裂解机制。我们对VP3的基因组序列进行分析，预测VP3的gp29和gp45与噬菌体晚期裂解宿主菌、释放子代噬菌体有关。VP3 gp43与具有糖基转移酶活性的T7 gp16有较高相似性，也被列为研究对象。我们在多个表达系统中克隆表达这三个蛋白，尝试不同纯化方法，调整重组蛋白与VP3敏感菌株的作用条件（pH值，温度，Zn2+，tritonX-100等），未发现gp29对菌株有裂解活性。Gp29单独或与gp45一起在VP3敏感菌株内部诱导表达，也不能引起菌株的裂解。表达的gp43和gp45不能引起VP3敏感菌株的裂解。我们推测虽然gp29与噬菌体T7的溶菌酶相似度较高，但功能上二者还是有相当大的差异。噬菌体VP3的裂解机制未能明确，需要进一步探讨。