维甲酸合成酶和代谢酶介导WT1调控维甲酸信号通路参与肾脏发育的研究

WT1是调控肾脏发育的关键转录因子，其突变造成肾脏发育异常和肾母细胞瘤。维甲酸(RA)也是肾脏发育所必需，敲除RA合成酶造成肾脏发育障碍。最近有研究显示WT1与一些RA合成代谢酶表达相关，前期我们分析发现RA合成酶启动子有WT1结合模序，但未知WT1是否在胚肾直接调控RA合成代谢酶。本课题拟①在胚肾细胞诱导WT1表达和siRNA沉默WT1表达，结合ChIP和启动子报告基因方法，探讨胚肾细胞中WT1是否调控RA合成酶和代谢酶表达。②通过体外酶活性测定，以及WT1可诱导胚肾细胞与含RA报告基因的细胞共培养，研究WT1能否通过改变RA合成酶和代谢酶表达调控维甲酸浓度。③用小鼠胚肾器官体外培养，研究siRNA沉默Wt1表达及撤除siRNA恢复Wt1表达，能否通过改变RA合成代谢影响胚肾发育。本课题有望阐明WT1通过调控RA合成酶及代谢酶参与肾脏发育的机制，深化对WT1参与肾脏发育和病理机制的认识。

维甲酸在体内主要从维生素A由两步氧化反应合成，在肾脏和其他器官发育中发挥不可替代的作用。催化视黄醛向维甲酸合成的酶主要包括ALDH1A1, ALDH1A2 和ALDH1A3。这些酶在肾脏发育不同阶段表达情况比较复杂，控制其表达的分子机制研究不多。在本研究中我们用体外证据显示在胚肾细胞WT1能负调控维甲酸合成酶ALDH1A1, ALDH1A2 和ALDH1A3的表达，造成维甲酸合成明显受阻。另外，WT1抑制ALDH1A1表达的作用能显著的被HDAC抑制剂所逆转。综上所述，我们为WT1和HDACs在胚肾细胞系中是内源性维甲酸合成酶的强调节因子提供了证据， 提示其可能在肾脏发育中参与维甲酸合成的调控。