应用OCT研究依赖PLA调控NETosis促进斑块侵蚀血栓形成的作用及机制

Plaque erosion and subsequence thrombosis is one of the mechanisms of acute coronary syndrome (ACS), however, little is known on the molecular mechanism of thrombosis. In our previous work, optical coherence tomography (OCT) has been confirmed with its superiority for diagnosing plaque erosion which contained mainly platelet-rich white thrombus. Furthermore, we have found that neutrophil extracellular traps (NETs) may play an important role in promoting thrombosis. Undoubtedly, as the initial step of thrombosis, activated platelets through P-selectin combined with neutrophils resulted in the form of platelet leukocyte aggregation (PLA). However, the mechanism whether the new process of cell death named as NETosis of neutrophil was regulated by PLA is still in the air. Therefore, in our current study, it would be crucial important to understand the whole pathophysiology in plaque erosion and thrombosis by OCT, together with flowcytometrty, western blot, PCR and so on. In order to illustrate the role of PLA-dependent in regulating neutrophils polarization, as an essential requirement for NETosis in forming NETs. We hope to provide a novel perspective with the mechanism of plaque erosion and thrombosis, to give a theoretical basis for individual targeting intervention and antithrombotic strategies.

斑块侵蚀血栓形成是急性冠脉综合征（ACS）发生的重要病理机制，但其血栓形成的分子机制尚不清楚。我们前期通过光学相干断层成像技术（OCT）证实，斑块侵蚀主要形成富含血小板的白色血栓，同时发现中性粒细胞胞外诱捕网络（NETs）的形成可能在斑块侵蚀诱发血小板聚集促进血栓形成中起关键作用。活化的血小板通过P选择素与中性粒细胞结合形成聚集体（PLA）在血栓形成初期的作用毋庸置疑，然而是否PLA与调控中性粒细胞启动新的坏死方式NETosis有关，并促进NETs形成，机制尚不明确。因此，本课题将联合血管内OCT，通过流式细胞技术，蛋白免疫印迹和PCR等方法，从分子，细胞和整体三个层面研究PLA通过调控中性粒细胞极化诱导NETosis形成NETs在斑块侵蚀血栓形成中作用和机制，为斑块侵蚀的靶向干预和抗栓策略提供理论依据。

斑块侵蚀血栓形成是急性冠脉综合征（ACS）发生的重要病理机制，但其血栓形成的分子机制尚不清楚。项目通过一系列在体和体外研究比较和阐明斑块侵蚀在斑块和血栓形成过程中关键蛋白、代谢产物的表达差异，首次证明中性粒细胞及其特殊的死亡形态“中性粒细胞捕获网”（NETs）参与了斑块侵蚀血栓形成过程，为揭示斑块侵蚀的发生机制提供新思路。主要结果如下：.1、构建“内皮损伤-血栓形成”的侵蚀样动物模型。既往动物研究集中在脂质斑块破裂方向，近10年随着腔内影像技术的发展才逐渐对急性冠脉综合征发病机制有了全面的认识，目前已知引起急性冠脉综合征的病因除了斑块破裂，斑块侵蚀患者占约1/3。因此，制备可靠、重复性高的在体动物模型对研究发病机制、干预靶点具有重要的应用价值。除应用FeCl3成功构建出“内皮损伤-血栓形成”的侵蚀样动物模型外，本课题首次在体外证实香烟提取物焦油可间接诱导中性粒细胞生成NETs，为进一步研究吸烟患者斑块侵蚀血栓形成的机制提供了新方向。.2、发现并证实在STEMI患者中中性粒细胞在血栓性病变中发挥重要作用。首先，NETs关键蛋白MPO及NE显著高于稳定性心绞痛患者；其次，联合腔内影像技术OCT证实STEMI患者血浆中PTX3水平与残余血栓负荷呈负相关。上述研究结果提示NETs参与血栓形成全程，一方面可能成为急性事件的新预测因素，另一方面是ACS个体化治疗的新靶点。.3、应用OCT证实斑块侵蚀患者采用药物保守治疗策略远期预后良好。提示急性冠脉综合征斑块侵蚀患者对抗栓治疗敏感，提示对这一血栓形成过程的机制研究具有重要的临床意义。在项目中，首次联合全基因组测序技术检测STEMI患者血液及血栓样本中微生物基因片段，提示细菌性炎症可能参与了急性血栓的快速形成过程。但由于研究样本量有限，尚不能给予确定性结论和推广应用，项目组下一个阶段将对该部分结果进行更深入的研究和讨论。