阻断alpha 2肾上腺素能受体后小檗碱发挥抗脓毒症效应的免疫学机制研究

目前脓毒症并发感染性休克患者的死亡率仍高达40%-60%，脓毒症患者的免疫状况及其调节已成为现代脓毒症研究的热点问题。我们研究发现，α2肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾与小檗碱联合应用能显著降低内毒素血症小鼠血清肿瘤坏死因子（TNF）-α的含量，却可升高白介素（IL）-1β和干扰素γ的水平；单独应用小檗碱或育亨宾并不能降低脓毒症小鼠的死亡率，然而，该剂量的育亨宾和小檗碱联用却能显著降低脓毒症小鼠的死亡率，但是其作用机制尚不清楚。本项目利用盲肠结扎穿孔小鼠脓毒症模型，从炎性复合体中caspase-1活化、淋巴细胞凋亡和干扰素γ的角度探讨阻断α2肾上腺素能受体后小檗碱发挥抗脓毒症效应的免疫学机制，为临床降低脓毒症患者的死亡率提供新的策略。

开发新的治疗策略改善脓毒症患者生存是危重医学领域急需解决的重要课题，我们前期研究中发现α2肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾与小檗碱合剂能显著降低脓毒症小鼠的死亡率，可能会成为降低脓毒症患者死亡率的新措施，但其作用机制并不清楚。本项目旨在：(1)观察不同剂量的育亨宾和/或小檗碱对CLP脓毒症小鼠死亡率的影响，并进一步观察育亨宾和小檗碱对脓毒症小鼠器官损伤的影响；(2)观察育亨宾和小檗碱对脓毒症小鼠细菌清除的影响；(3)验证育亨宾和小檗碱联合应用是否通过抑制NF-kB或 caspase-12导致caspase-1的活化，促进IL-1和 IL-18释放，进而诱导干扰素生成，降低脓毒症小鼠的死亡率；(4)验证育亨宾和小檗碱联合应用是否阻断淋巴细胞凋亡。从而阐明阻断α2肾上腺素能受体使小檗碱发挥抗脓毒症效应的免疫学机制。结果发现，小檗碱与育亨宾联用降低脓毒症小鼠死亡率的机制与其减轻脓毒症诱导的肝、肾、肺与胰腺损伤以及增强机体的杀菌活性有关，小檗碱和育亨宾合剂能抑制脓毒症小鼠TNF-α和IL-1β的生成，促进脓毒症小鼠IL-12、IFN-γ和IL-10的产生。该合剂抑制脓毒症小鼠TNF-α和IL-1β的生成与其抑制NF-κB和Caspase-1活化有关，但其抑制脓毒症小鼠Caspase-1的活化与Bcl-xL和Caspase-12途径无关。小檗碱和育亨宾合剂促进脓毒症小鼠IFN-γ的表达并不依赖Caspase-1- IL-18途径。IFN-γ和IL-10抗体均能消除小檗碱和育亨宾合剂对脓毒症小鼠的保护作用。表明小檗碱和育亨宾合剂既能发挥抗炎作用，同时又能增强脓毒症小鼠对细菌的清除能力，这种作用方式为研究治疗脓毒症的药物提供有价值的研究思路。进一步研究发现小檗碱通过非a2肾上腺素能受体途径逆转LPS诱导的肠损伤。小檗碱和育亨宾预处理均能抑制小鼠内毒素性心功能障碍，其机制与减少心肌细胞凋亡和I-κBα的磷酸化有关。这些结果说明小檗碱对脓毒症小鼠心脏和肠道的保护作用并不依赖于它的α2肾上腺素能受体激活作用，体内α2肾上腺素能受体激活参与了脓毒症性心功能障碍的发生机制。目前，临床上并没有特异的措施防止脓毒症性心功能障碍，我们的发现可能为脓毒症性心功能障碍的治疗提供新的手段。目前已发表论文6篇，其中SCI收录论文3篇， 培养硕、博士研究生各1名，完成了本项目计划的研究任务。