维吾尔族霍奇金淋巴瘤EBV-LMP2A多肽激发的HLA-A2限制性CTL应答研究

EB病毒(EBV)感染与人类白细胞抗原(HLA)相互影响共同参与了霍奇金淋巴瘤(HL)的发生、发展及预后。新疆地区维吾尔族HL患者EBV感染率较高，而维吾尔族人群HLA类分子分布频率存在自身特点。故本课题拟通过病例－对照研究的方法，采用PCR-SSOP法筛选与维吾尔族EBV阳性HL发病相关的HLA-A2亚型，确定分布频率相对较高的遗传易感基因或遗传拮抗基因，并利用表位预测软件和鉴定实验来预测、鉴定经上述方法筛选出的HLA-A2亚型的限制性CTL表位，在此种基础上，进一步应用ELISPOT技术了解筛选出的EBV-LMP2A抗原肽所激发的HLA-A2亚型限制性CTL免疫识别杀伤能力，比较各自免疫贡献差异，部分诠释与维吾尔族HL发生有关的免疫应答和种族遗传背景的内在联系，为HL的发生机制提供线索，也为今后维吾尔族HL患者EBV疫苗的研发提供实验基础。

目的：探讨EBV感染、HLA-A与新疆维吾尔族HL相关性，并初步研究维吾尔族HL患者EBV-LMP2A的HLA-A2限制性CTL免疫应答状况，为今后研制个体化EBV/HL疫苗奠定基础。方法：1)应用ISH对70例维吾尔族HL患者组织标本进行EBER检测，了解EBV阳性者组织中LMP-2A的表达状况。2)以巢式PCR定性检测维吾尔族HL患者外周血EBV-DNA的感染状况，继而对EBV-DNA阳性者，联合巢式-荧光定量PCR检测其EBV-DNA载量。3)采用SBT方法检测上述HL患者HLA-A高分辨等位基因的分布频率。4）预测及合成EBV-LMP2A的HLA-A2限制性表位肽并初步鉴定。结果：1)本组维吾尔族HL患者组织中EBER阳性率为58.9%（41/70），RLH组中EBER阳性率为25.0%（5/20），两者间差别具有统计学意义（P＜0.05）。EBV阳性维吾尔族HL患者中LMP-2A蛋白阳性表达率为57.7％（15/26）。2)维吾尔族HL患者外周血EBV-DNA检出率为49.4%%（40／81），健康人为26.4%（29/110），两者有统计学差异（P＜0.05），而载量无差异（P＞0.05）。3)维吾尔族HL患者中等位基因HLA-A*01:01:01:01、A*03:01、A*01:01、A*02:07分布频率较高；HLA-A*02:01、A*11:01则相对较低（P＜0.05）。携带HLA-A*11:01:01等位基因的维吾尔族HL患者EBV阳性表达率则高于携带此基因型的健康人（P＜0.05）。4）预测并合表位，即LLLAFVLWL（280～288）、FLLMLLWTL(325～333)、LMLLWTLVV(327～335)，而携带HLA-A*02:01基因型维吾尔族HL患者与健康人CTL免疫应答强度无差异（P＞0.05）。结论：1)EBV与维吾尔族HL有关联。2）HLA-A*01:01:01:01、A*03:01、A*01:01、A*02:07基因型可能是维吾尔族HL的易感基因，而HLA-A*02:01、A*11:01可能为其拮抗基因。HLA-A*11:01:01基因型可能是维吾尔族EBV阳性HL的易感基因型。3）上述多肽可能是EBV-LMP2A的CTL表位。携带HLA-A*02:01基因维吾尔族HL患者的发病机制仍有其它CTL相关免疫机制参与。