基因重组紫杉醇生物合成二萜环化酶形成紫杉烷的研究

课题目标克隆中国紫杉烯合成酶基因重组到微生物表达系统研究紫杉烷形成。从紫杉烷含量高的中国红豆杉愈伤组织获得了中国红豆杉紫杉烯合成酶基因并在国际基因公用数据库注册，是我国首先注册的国产红豆杉紫杉烯合成酶基因。还得到两个截短的含酶活性部位的基因片段。构建了三个基因片段的原核表达体系，均获得高表达。还建立了产生萜类化合物的赤霉菌湖霉素共转化体系并得到含紫杉烯合成酶基因的赤霉菌转化子，重组赤霉合成产物经薄层检测与原始菌株有明显差别，正作气质鉴定及化合物分离。为获得化合物多样性克隆了赤霉菌细胞色素氧化酶启动子以将氧化酶基因重组入赤霉菌，建立植物基因和真菌组合生物合成制备具有自主知识产权先导物的新方法。