c-FLIP在上皮间质转化介导的肿瘤侵袭转移中的作用及和厚朴酚的调节机制

c-FLIP, an inhibitor of apoptosis, is highly expressed in tumor tissues and involved in the invasion and metastasis of cancer. Now, it becomes a target for cancer therapy. NF-κB and Akt signaling pathways are regulated by c-FLIP. Epithelial to mesenchymal transition (EMT) stimulated by TNFαis also associated with the two pathways. Our study shows that TNFα increases c-FLIP expression level. We will study the role of c-FLIP in the invasion and metastasis mediated by EMT induced by TNFα in which NF-κB and Akt signaling pathways participate. Honokiol (HNK) inhibit the invasion and metastasis of cancer. Our research shows that HNK decreases the expression level of c-FLIP and suppresses the activation of NF-κB in cancer cells. The research will study that HNK inhibit the invasion and metastasis of cancer mediated by EMT through reducing the expression level of c-FLIP. The project will study these aspects so as to elucidate the role of c-FLIP in the invasion and metastasis of cancer mediated by EMT and inhibitory mechanism of cancer invasion and metastasis by HNK, which will provide a biomarker and a lead chemical for the development of drugs inhibiting cancer invasion and metastasis.

c-FLIP是一个凋亡抑制因子，在肿瘤组织中高表达，参与肿瘤侵袭转移，已经成为肿瘤治疗的靶点。在信号传导方面，c-FLIP调节NF-κB和Akt信号通路，TNFα刺激产生的EMT也与NF-κB和Akt信号相关，研究基础表明，TNFα能够增加c-FLIP的表达，本项目将研究c-FLIP能否通过NF-κB和Akt信号通路参与TNFα诱导的EMT，从而参与肿瘤侵袭转移。和厚朴酚（HNK）能抑制肿瘤侵袭转移，我们的研究表明，HNK能够抑制c-FLIP的表达和肿瘤细胞的生长，也能抑制TNFα诱导的NF-κB的活化，该项目将进一步研究HNK是否通过抑制c-FLIP的表达，继而调节NF-κB和Akt信号途径和抑制EMT，最终抑制肿瘤的侵袭转移。以上研究将阐明c-FLIP在EMT介导的肿瘤侵袭转移中的作用以及HNK抑制肿瘤侵袭转移的c-FLIP相关的分子机制，为开发抗肿瘤转移药物提供靶点和先导化合物。

c-FLIP能够抑制细胞凋亡、阻止细胞分化、促进肿瘤发生发展等。上皮-间质转化 (epithelial–mesenchymal transition EMT) 与肿瘤细胞侵袭和转移有重要联系。和厚朴酚( Honokiol，HNK ) 是具有抗炎、抗血管生成、抗氧化以及抗肿瘤的活性，其中抑制肿瘤细胞迁移的能力受到了人们的关注。本项目研究了HNK抑制非小细胞肺癌细胞和乳腺癌细胞迁移的相关机制。首先采用TNF-α作为诱导剂，通过划痕、Transwell及Western blot实验证明了HNK对TNF-α诱导的肿瘤细胞迁移的抑制作用及c-FLIP表达的抑制作用。Transwell法及划痕实验证实TNF-α联合TGF-β1能够明显增强非小细胞肺癌A549及H460的迁移能力， HNK能够抑制A549及H460迁移以及TNF-α+TGF-β1诱导的非小细胞肺癌A549及H460细胞的迁移。Western blot 实验证明，TNF-α+TGF-β1作用于A549及H460细胞后，能够诱导c-FLIP以及EMT相关蛋白N-Cadherin、Snail表达上调。HNK能够降低TNF-α+TGF-β1诱导的c-FLIP以及EMT相关蛋白N-Cadherin、Snail表达。最后，当用siRNA敲低c-FLIP 和N-Cadherin的表达后，结果表明，c-FLIP的表达降低后，N-Cadherin的表达和Snail的表达均降低。而敲低N-Cadherin的表达后，c-FLIP的表达未明显变化，但Snail的表达明显降低。在HNK降低非小细胞肺癌细胞株中snail表达的基础上，我们进一步研究了HNK对snail介导的乳腺癌增殖及侵袭转移的影响，研究结果表明，HNK能抑制MCF-7、MDA-MB231、4T1细胞的增殖、侵袭和转移，剂量及时间依赖性地降低Snail/Slug的表达，这种降低作用不在转录及蛋白降解水平，而是在翻译水平进行的，经动物实验表明，HNK能减少4T1的肺转移结节数。c-FLIP通过调节N-Cadherin和Snail的表达参与肿瘤细胞的EMT过程，HNK通过调节c-FLIP的表达而抑制非小细胞肺癌细胞的侵袭和转移。该研究提供了c-FLIP可能是一个肿瘤侵袭转移相关的靶点，我们可以此为模型进行抗肿瘤药物的筛选和研究，为肿瘤开发新药提供了靶点和思路。