MicroRNA在乳腺癌癌前病变中的表达及其相关功能的研究

microRNA在乳腺癌的发生发展中起着重要作用。但迄今为止，有关microRNA在乳腺癌癌前病变中的表达的研究甚少。我们在前期工作基础上，拟进一步应用microRNA microarray、microRNA 原位杂交和qRT-PCR的方法系统研究microRNA在乳腺癌癌前病变（平坦型上皮不典型性和导管内癌）中的表达，以期发现在乳腺癌发生早期发挥重要作用的microRNA，进而对这些新发现的microRNA进行功能学研究，探讨其与乳腺癌发生、发展的关系，从而为乳腺癌的早期发现寻找有效的肿瘤标志物，并且为乳腺癌的治疗研究提供新靶点。

1 运用实时定量对在21对DCIS和相应癌旁组织中表达差异的miRNA 进行进一步的验证工作。我们已经验证了在文献中报道的在正常乳腺组织和浸润性乳腺癌中表达差异的miRNA以及甲基化在DCIS中对miRNA-125b表达变化的影响，此次为了验证既往乳腺癌中未曾报道过，而在我们的芯片结果DCIS中表达与正常组织有明显差异的miRNA, 即miRNA-132-3p, miRNA-382-5p, miRNA-409-3p, miRNA-154-5p, miRNA-423-3p, miRNA-181d。.2 在以上基础上我们选择其中表达改变有意义的miRNA进行功能学研究，我们通过文献发现miRNA-132-3p在胰腺癌中表达下调，并且其具有抑制细胞增殖的作用。而在我们的结果中显示，与癌旁正常组织相比较，其在DCIS中表达下调，并有明显的统计学意义。为了研究其在乳腺癌中的功能，我们选取MCF-7、BT-549和MDA-231三种细胞系对其进行增殖学方面的验证。主要是通过CCK-8、细胞克隆和细胞周期的流式实验进行验证。通过CCK-8实验我们得出：在三种乳腺癌细胞系中miRNA-132-3p均扮演抑制增殖的作用；在细胞克隆中，MCF-7与MDA-231均证实此miRNA的抑制增殖作用，但在实验过程中我们发现BT-549细胞系增长方式为分散性生长，细胞在克隆形成中并不能成簇生长，故其无法进行细胞簇计数，但我们又通过对此细胞进行细胞周期流式实验证实了miRNA-132-3p在此细胞系抑制增殖的作用。