慢性心衰的MAPK通路表达与温阳法的干预

慢性心力衰竭(CHF)是各种严重心脏疾病终末阶段所表现出来的一种临床综合征，心力衰竭病人5年内病死率高达40％～60％。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导途径存在于所有真核生物中，被认为是与细胞增殖、分化或凋亡调控密切相关的细胞信号转导途径。国外研究已初步证实其经典的4条途径ERK1/2、JNK、P38、ERK5与慢性心衰的心肌凋亡与肥大有着密切联系，但尚未阐明具体关系。中医用温阳法治疗CHF是一个经典而有效的疗法，前期研究亦证实其疗效，此实验欲进一步阐明中医温阳法治疗慢性心衰的转导机制，试图将其疗效与4个具体通路的表达相联系，以期找出特异性通路并对其表达的具体变化加以阐释。

为探讨温阳振衰颗粒对阿霉素诱导的慢性心衰模型兔心肌MAPK信号通路的影响，课题组观察温阳振衰颗粒对阿霉素诱导性慢性心衰模型兔心肌ERK1/2、JNK、P38及ERK5表达的影响。实验发现阿霉素造模后，模型4、8周组心肌P-ERK1/2水平均高于正常对照组，且模型8周组较模型4周组升高更为明显。至8周末时，温阳各组心肌P-ERK1/2水平均低于模型8周组，其中以阳性对照组和温阳高剂量组心肌P-ERK1/2水平升高最为缓慢。心肌JNK、P38的检测结果也呈现相似的趋势，但心肌ERK5结果呈相反的趋势。模型对照组和治疗各组在4、8周末心肌ERK1/2、JNK、P38及ERK5总蛋白及心肌ERK1/2mRNA、JNKmRNA、P38mRNA及ERK5mRNA水平与其余各组相比差异无显著性意义。上述结果说明了温阳振衰颗粒能下调ERK1/2、JNK、P38蛋白磷酸化的水平，上调ERK5蛋白磷酸化的水平，其中以高剂量温阳振衰颗粒最为明显，这可能是其改善慢性心衰时心室重构的重要机制之一。. 课题组在实验过程中，发现大量文献均以体外细胞培养作为受试对象来应用MAPK信号通路抑制剂，对于上述4条通路特异性抑制剂的体内长时间应用方法尚缺乏理想的文献支持，国内外相关文献报道极少。故为弥补这一技术缺陷，我们完成了针对体内长时间应用MAPK通路抑制剂的给药方法和给药浓度探索。结果发现PD低、高剂组和阳性对照组心肌P-ERK1/2水平上调较模型对照组缓慢，其中以PD高剂组心肌P-ERK1/2水平升高最为缓慢。各组心肌P-ERK5均不同程度下调，其中以模型对照组下调最为明显。PD低、高剂组和阳性对照组心肌P-ERK5水平下调较模型对照组缓慢，其中以PD高剂组心肌P-ERK5水平降低最为缓慢。各组在4周末心肌ERK1/2、ERK5总蛋白水平与其余各组相比差异无显著性意义。上述结论说明了PD98059持续静脉注射4周能显著下调ERK1/2蛋白磷酸化的水平，上调ERK5蛋白磷酸化的水平。课题组按上述思路研究了JNK和P38信号通路抑制剂的体内长期应用方法，结果发现SP600125持续静脉注射4周能显著下调JNK蛋白磷酸化的水平，SB203580持续静脉注射4周能显著下调P38蛋白磷酸化的水平。上述结果为体内长期应用MAPK信号通路抑制剂提供了思路，为慢性疾病的基础研究提供了新的方向。