C-BSA渗透泵肾炎模型探讨温阳利水法对UPP通路及NF-κB的干预

本课题以渗透泵技术取代注射制备C-BSA大鼠肾炎模型探讨温阳利水法对UPP通路及NF-κB的干预。渗透泵可定时定量释药，克服传统造模需反复注射、刺激动物、耗时长、不易操作等缺点，提高造模成功率，为肾小球肾炎（CGN）发病机理及药理研究提供新的造模方法。通过观察以真武汤为经典方剂的温阳利水法对C-BSA渗透泵肾炎模型大鼠的作用，应用ELISA、SABC、Western Blot、RT-PCR、EMSA等技术检测肾脏IL-1β、TNF-α的含量、NF-κB、Ub、TNF-α的mRNA及蛋白表达、NF-κB活性、泛素化蛋白含量等，探讨C-BSA肾炎大鼠肾脏的UPP通路、NF-κB等表达特征，及真武汤对其干预作用，从整体和基因水平上探讨CGN发病机制，阐明温阳利水法治疗CGN的作用环节，为寻找防治CGN策略开拓新手段，为渗透泵技术和动物模型制备结合提供新的思路和借鉴。

慢性肾小球肾炎（CGN）是一种免疫炎性疾病，核因子-κB（NF-κB）、泛素-蛋白酶体途径（UPP）处在免疫炎症反应调节的关键地位。本课题引入微渗泵技术探讨一种全新CGN模型并从动物生存情况、24h尿蛋白及尿肌酐、血液生化、病理学和免疫荧光IgG沉积多指标全面评价模型可靠性，数据显示渗透泵缓释C-BSA诱导大鼠CGN是可靠、稳定的方法。本课题还应用ELISA、SABC、Western Blot、RT-PCR、EMSA 等技术检测CGN大鼠肾脏IL-1β、TNF-α 的含量、NF-κB、Ub、TNF-α mRNA及蛋白表达、NF-κB活性、泛素化蛋白含量及病理组织变化，探讨C-BSA肾炎大鼠肾脏的UPP通路、NF-κB等表达特征及真武汤对其的干预作用。结果表明，与正常大鼠比较，CGN模型大鼠血清及肾组织中的IL-1β、TNF-α水平显著升高；TNF-α、NF-κB蛋白表达明显上调；NF-κB p65 mRNA表达增加而I-κB mRNA下降，NF-κB的DNA结合活性升高；Ubiquitin蛋白表达明显下调。给予温阳利水方真武汤进行治疗后，这些指标均有不同程度的逆转。结果提示，CGN模型大鼠UPP途径高度活化，NF-κB大量激活，CGN的病理进程与UPP途径和NF-κB的激活密切相关。温阳利水法真武汤可以通过阻碍UPP途径，进而抑制NF-κB激活的相关分子机制从而治疗慢性肾小球肾炎。