从肥大细胞蛋白酶激活受体表达研究抗过敏“药对”防风-乌梅的配伍机制

过敏性疾病被WHO列为21世纪重点研究和防治的三大疾病之一,近几年肥大细胞表面蛋白酶激活受体（PAR）表达在过敏性疾病的研究中成为焦点,成为抗过敏药物研究的靶点;"药对"是一种相对固定的组方单位，药对防风、乌梅伍用，出自《经验方》，当代名老中医祝谌予之验方过敏煎中的重要的药对之一，起到祛风抗过敏作用，临床上主要应用于过敏性疾病治疗。课题组前期研究结果提示"药对"防风-乌梅具有抗过敏作用且机制与血清中IgE、IL-4的降低有关。本课题拟融合血清药物化学研究思路，以肥大细胞PAR为切入点，从细胞层次进行药对防风-乌梅的抗过敏有效成分的筛选，通过实时定量PCR、流式细胞术等方法，结合数学模型，探求有效成分"组-效"关系，从整体动物水平进行活性再次验证，以明确抗过敏的药效物质基础，揭示配伍机制，为抗过敏中药及药对配伍机制研究提供新的思路与方法。

本课题围绕肥大细胞PAR抗过敏新机制，研究防风-乌梅抗过敏物质基础，并探索了该药对抗过敏配伍机制。本研究首先采用大鼠被动肥大细胞脱颗粒试验，对“药对”防风-乌梅有效组分进行了筛选，结果显示药对防风-乌梅配伍抑制肥大细胞脱颗粒活性部位主要存在于水提物，且防风、防风和乌梅配伍水提物抑制肥大细胞脱颗粒作用强于乌梅水提物； “药对”防风-乌梅移行入血成分研究结果显示，防风-乌梅配伍水提物长期给药后吸收入血成分主要来自防风，相对单独给予防风组血清，其中的升麻素苷有显著升高，提示升麻苷是移入血行的重要成分；防风-乌梅移入血行成分升麻素苷抗过敏研究中发现升麻苷对P815和肥大细胞脱颗粒模型P815细胞的PAR-2的表达无明显作用，提示防风-乌梅抗过敏作用的活性成分可能不是升麻素苷，或升麻素苷在体内代谢后或跟其他化合物共同发挥抗过敏效应；药对配伍机制研究结果提示防风、乌梅、防风和乌梅的配伍在体外抑制肥大细胞表面PAR-2表达，抑制分泌Th2细胞因子IL-4，其信号通路可能与AKT、ERK信号途径有关；防风、乌梅、防风和乌梅的配伍可抑制肥大细胞脱颗粒，其机制可能与阻断肥大细胞脱颗粒信号自身放大信号中关键分子PAR-2、IL-4、HA等有关；防风和乌梅配伍减轻药物对细胞的毒性作用，并可增大抑制肥大细胞PAR-2表达、分泌组胺和IL-4，提示防风和乌梅配伍具有“减毒增效”作用。动物实验进一步证实防风-乌梅配伍具有抗哮喘作用；另外新发现防风-乌梅配伍通过抑制平滑肌增厚而发挥抑制气道重塑作用，其机制可能与PAR-2有关。本研究通过体内外研究，从炎症角度阐明了药对防风-乌梅配伍发挥抗过敏作用中“减毒增效”的配伍机制，并探讨了防风-乌梅抗过敏作用机制，研究中新发现药对防风-乌梅配伍抗哮喘新的作用-抑制气道重塑，为下一步系统研究药对防风-乌梅配伍机制提供了新的思路。