PAR-1调控绒毛外滋养细胞sFlt-1表达在母胎界面血管形成中作用的研究

可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)与母胎界面血管形成有着密切的关系。滋养细胞是母胎界面表达sFlt-1最重要的细胞，但其表达的调控机制不明。前期研究发现凝血酶可以促进EVT细胞系sflt-1的表达。为了明确PAR-1调控EVT sFlt-1表达在母胎界面血管形成中的作用，本项目拟利用EVT细胞系及前期实验已成功培养的绒毛外滋养细胞，使用凝血酶及其抑制剂，PAR-1激动肽及选择性抑制剂处理EVT、PAR-1 siRNA转染EVT，探讨PAR-1调控EVT sFlt-1表达机理.并进一步通过体外及在体动物实验，研究该机制在胎盘血管形成中的作用，并为与滋养细胞功能异常、胎盘血管发育障碍相关的病理妊娠的临床治疗提出新设想。

可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)与母胎界面血管形成有着密切的关系，滋养细胞是表达sflt-1最重要的细胞，但其表达的调控机制尚不明确。研究发现凝血酶可以促进绒毛外滋养细胞系sflt-1的表达，而PAR-1是凝血酶活化受体。为了探讨PAR-1调控滋养细胞sflt-1表达在母胎界面血管形成中的作用。本课题组利用凝血酶，PAR-1激动剂SFLLRN，凝血酶拮抗剂PPACK处理滋养细胞，检测滋养细胞sflt-1的表达变化，同时收集细胞培养上清，进行管腔形成和血管重塑实验研究。在基因水平，课题组使用PAR-1 shRNA-FR2/H-FR2转染滋养细胞，了解细胞相关功能变化：包括对血管发育相关因素sFlt-1、VEGF、PlGF表达的影响；对HUVEC 管腔形成能力的影响。深入探讨PAR-1在不同状态下对滋养细胞的功能及血管新生和重塑的影响。为进一步明确以sflt-1为靶点，是否有多条通路对其进行抑制，从而达到改善滋养细胞功能及血管新生重塑的目的。课题研究者建立了Cocl2诱导的体外H8细胞的缺氧模型，使用edaravone对缺氧滋养细胞进行干预。研究Cocl2，edaravone对滋养细胞增殖凋亡、血管发育相关因素sFlt-1、VEGF、PlGF表达的影响；对滋养细胞侵蚀力的影响；对HUVEC 管腔成形能力的影响。通过细胞水平及动物试验研究发现：1、PAR-1活化下，滋养细胞sflt-1mRNA和蛋白水平表达升高，管腔形成能力受抑制，血管重塑受损；在PAR-1抑制条件下，滋养细胞sflt-1表达降低，蜕膜内血管新生和血管重塑能力均有所改善。2、使用氧自由基清除剂edaravone可以减少滋养细胞的凋亡，增强其侵蚀能力，改善缺氧导致的滋养细胞sflt-1表达升高及管腔形成障碍。结论：PAR-1调控sflt-1表达在母胎界面血管形成中有重要作用，抑制PAR-1的活化有助于胎盘血管的形成。Edaravone通过氧自由基清除改善了滋养细胞的凋亡及抗血管物质sflt-1表达的生成。故以sflt-1为中心靶点，通过PAR-1、氧自由基清除通路予以抑制sflt-1的表达，可为治疗子痫前期、胎儿生长受限等病理妊娠提供了新的设想。