基于Notch-Dll4/Jagged1信号通路探讨当归补血汤干预糖尿病难愈性溃疡新生血管尖端细胞及柄细胞增殖的研究

Diabetic ulcer is a major cause of amputation in diabetic patients. The common pathogenesis of refractory ulcer not healing is Qi deficiency and blood stasis, skin dystrophy.The main pathophysiological mechanism of difficult healing is that the proliferation of cells and stem cells in the new blood vessels is not coordinated, and the growth of granulation tissue is poor. Notch-Dll4/Jagged1 signaling pathway is the key pathway to regulate the growth of the tip cells and stem cells. Have a good effect of Danggui Buxue Decoction in the treatment of refractory diabetic ulcer, possibly through Notch-Dll4/Jagged1 signaling pathway, interfere with the tip cell and stalk cell proliferation,and affect the healing of ulcers. This study, the effects of the combination of different doses of Danggui Buxue Decoction on the signaling pathway will be observed.and the expression of Notch-Dll4/Jagged1 signaling pathway related proteins and angiogenesis in the healing process of sore surface will be detected.Inhibiting the Notch-Dll4/Jagged1 pathway and comparing the changes in the cell and stem cells of the neovascularization in the sore surface. In order to explore the mechanism of the effect of Danggui Bu Xue Decoction on wound healing, and to study on the different target points in the process of angiogenesis in the process of angiogenesis and blood activating medicine.To provide experimental basis for clinical treatment of diabetic ulcer.

糖尿病难愈性溃疡是导致糖尿病患者截肢的主要原因。难愈性溃疡的常见中医病机是气虚血瘀，肌肤失养；难以愈合的主要病理生理机制是新生血管尖端细胞和柄细胞增殖不协调，肉芽组织生长不良。Notch-Dll4/Jagged1信号通路是调节尖端细胞和柄细胞的生长的关键通路。当归补血汤治疗糖尿病难愈性溃疡有良好疗效，可能是通过Notch-Dll4/Jagged1信号通路，干预了尖端细胞和柄细胞的增殖，影响了溃疡的愈合。该研究通过观测当归补血汤不同剂量益气药物和补血药物组合对该信号通路的影响，检测疮面愈合过程中Notch-Dll4/Jagged1 信号通路相关蛋白表达和血管新生情况；抑制Notch-Dll4/Jagged1通路，对比疮面中新生血管尖端细胞和柄细胞发生的变化等，探讨当归补血汤在创面愈合中的作用机制，研究益气药和活血药在血管新生过程中不同作用靶点，为临床治疗糖尿病性难愈性溃疡提供实验基础。

糖尿病足溃疡作为糖尿病的严重慢性并发症之和临床常见的慢性难愈性溃疡，其创面血管新生困难是阻碍创面愈合的重要因素，创面血运不良，创面修复相关细胞及因子缺乏足够的血氧供应，是导致创面难以愈合的核心原因之一。中医学认为创面血管新生的过程与人体中气血的生成及其相互作用可能存在相关性。“气血交互与脉”，“气为血之帅”，气既可行血，又可生血；“脉为血之府”，血行脉中，对脉管具有营养作用；益气而生血行血，生血则充其脉，行血则利其脉，血脉调和通利则络生，进而生肌长肉，修复创面。以补气生血为治则的当归补血汤在糖尿病足创面愈合过程中有着良好疗效。本研究通过当归补血汤经典的黄芪当归5:1不同浓度和1:1和黄芪当归1:5对糖尿病小鼠、大鼠创面，人脐静脉内皮细胞模型进行研究，证实：1.当归补血汤能有效下调糖尿病足大鼠模型血清和创面新生肉芽中TNF-α、IL-6和IL-1β的表达，上调 VEGF 表达；通过抑制炎症反应和促进新生血管生成；其作用呈浓度依赖性。2.在细胞实验中，当归补血汤含药血清成浓度依赖性增加 VEGF 的表达，促进 iNOS 合成从而上调 NO 血管调控分子的表达，促进内皮细胞增殖迁移。3.当归补血汤可以通过干预Notch信号通路，上调通路中Notch1和DLL4表达，抑制Jagged1表达，促进创面中VEGF和FN表达，促进创面新生血管生成，抑制炎症细胞浸润，促进皮肤附属器新生，加快糖尿病足创面的愈合。4. 当归补血汤中，黄芪当归不同比例均可能通过干预Notch信号通路，上调通路中Notch1和DLL4表达，抑制Jagged1表达，促进创面中VEGF和FN表达，加速创面新生血管生成，加快糖尿病足创面的愈合；其中黄芪当归5:1配比的促血管新生和加速创面愈合的能力最强。课题从生物信息学分析、动物、体外实验三个层面阐明基于补气生血治则的当归补血汤治疗糖尿病足的作用机制，初步探索了当归补血汤中不同黄芪当归比例调控糖尿病创面血管新生的相关机制，体现了中医药理论治疗糖尿病足的重要性，为提升补气生血法调控血管新生的科学内涵和临床应用提供了部分理论依据。