具有调控VSMC增殖信号通路的新型二氢黄酮类小分子的构建及其调控机制研究

抑制血管平滑肌细胞（VSMC）增殖是防治动脉粥样硬化等心血管疾病的重要策略。本项目以前期发现的杜鹃素类衍生物能显著抑制VSMC增殖以及杜鹃素可调控人主动脉血管平滑肌细胞（HA-VSMC）丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路结果为基础，结合Angiotensin Ⅱ通过MAPK信号通路诱导VSMC增殖的科学依据，以杜鹃素为先导物，基于前期已阐明的构效关系，进一步系统构建合成具有高效抑制VSMC增殖的小分子化合物；并以此类高活性小分子化合物为分子探针，通过化学生物学、细胞分子生物学探讨其调控VSMC增殖的MAPK信号通路。进一步通过蛋白质组学深入研究此类活性化合物抑制VSMC增殖作用前后蛋白质谱的改变，经图像分析后选取差异蛋白斑点进行MALDI-TOF-MS和ESI-MS鉴定目标蛋白，寻找与VSMC增殖相关的新信号调节靶蛋白，综合分析探讨此类小分子在VSMC增殖信号通路中的调控作用与机制。

以杜鹃素（DJS-1）为先导物设计合成了112个新化合物；通过系统体外活性筛选获得3个具有显著的VSMC增殖抑制作用的高活性化合物（DJS-2，DJS-3，DJS-4）。细胞水平证明DJS-1和DJS-3可经调控PDGFR/ERK1/2及AKT信号通路抑制10%FBS诱导VSMC增殖，维持VSMC收缩表型；逆转p27、p21、CyclinE1、CDK2表达，显著减少S期细胞比例，将VSMC阻滞于G0/G1期；动物水平明确其经由维持VSMC收缩表型、抑制其增殖抑制球囊损伤致大鼠血管内膜增生；采用DARTS及MALDI-TOF质谱技术初步确定此类活性小分子抑制VSMC增殖作用的潜在靶蛋白可能为GRP78。实验还发现此类小分子可抑制VSMC外钙内流降低SHR收缩压水平；调节活性氧水平、抑制NAD(P)H氧化酶活性、提高eNOS活性逆转SHR大鼠主动脉壁重塑；经调控MAPK信号通路抑制血管内皮细胞凋亡、调解内皮细胞闭锁蛋白occluding的表达；基于基因组学筛选出18个差异基因，发现Adra1d基因与高血压关系密切，测序数据分析发现Adra1d基因参与了Pathway显著性富集的血管平滑肌收缩调节信号通路，探讨了此类活性小分子对SHR大鼠降压的初步机制。发表SCI收录的研究论文10篇，授权国家发明专利3项。