靶向LMP1干扰通过PI3K/Akt/mTOR通路逆转鼻咽癌细胞的TRAIL抵抗

TRAIL can selectively induce apoptosis in malignant tumor cells. Our prior studies found that: The nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells with LMP1 positive expression show TRAIL resistance. We hypothesize that targeted LMP1 interference reverses TRAIL resistance in nasopharyngeal carcinoma through PI3K/Akt/mTOR pathway. This project plans to use LMP1 high expression NPC cell line C666-1 as vitro model and nude mouse NPC xenograft as vivo model. Firstly, we will construct LMP1 siRNA to down-regulate LMP1 expression in NPC cell, and use MTT, flow cytometric analysis, western blot, JC-1, TUNEL assay to study the role of targeted LMP1 interference on TRAIL sensitivity. Furthermore, we will investigate targeted LMP1 interference reverses TRAIL resistance in nasopharyngeal carcinoma through PI3K/Akt/mTOR pathway. This study will first clarify the relationship between targeted LMP1 interference and TRAIL resistance, and look for theoretical basis on reversing TRAIL resistance of nasopharyngeal carcinoma.

TRAIL能选择性地诱导恶性肿瘤细胞发生凋亡。我们前期研究发现：LMP1阳性的鼻咽癌细胞存在TRAIL抵抗。由此我们提出假设：靶向LMP1干扰通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路活化逆转鼻咽癌细胞的TRAIL抵抗。本项目拟用前期筛选的LMP1高表达鼻咽癌细胞株C666-1为体外模型和裸鼠皮下种植瘤为体内模型。首先我们使用siRNA技术靶向干扰LMP1在细胞中的表达。运用MTT、流式细胞术、western blot、JC-1、TUNEL检测等技术研究靶向LMP1干扰是否影响鼻咽癌对TRAIL的敏感性；继而通过转染相应的活性序列分别回复mTOR和Akt在LMP1稳定沉默鼻咽癌细胞中的活化状态，研究靶向LMP1干扰是否通过PI3K/Akt/mTOR通路发挥作用。本项目首次探讨靶向LMP1干扰逆转鼻咽癌TRAIL抵抗的可行性和相关机制，为逆转鼻咽癌TRAIL抵抗奠定新的理论基础。

TRAIL能选择性地诱导恶性肿瘤细胞发生凋亡，有研究发现，某些肿瘤细胞对TRAIL不敏感，即发生TRAIL抵抗，但具体机制不明。我们前期研究发现：LMP1阳性的鼻咽癌细胞存在TRAIL抵抗。本项目主要研究LMP1导致鼻咽癌细胞TRAIL抵抗的主要机制，并探寻逆转机制。我们研究证实沉默LMP1表达可以有效的提高EB病毒阳性鼻咽癌细胞株C666-1对TRAIL的敏感性，同时LMP1干扰沉默可以抑制PI3K/Akt/mTOR通路的活化。结合该研究结果我们进一步探索逆转LMP1导致TRAIL抵抗的方法。有研究证实，绿茶多酚EGCG可以抑制LMP1激活的NF-κB转录通路。本项目进一步研究EGCG通过抑制LMP1激活的NF-κB转录通路逆转LMP1导致的TRAIL抵抗。我们发现EGCG在体外和体内环境中均可以明显提高LMP1高表达细胞株CNE-1-LMP1的TRAIL敏感性。本项目首次探讨靶向LMP1干扰逆转鼻咽癌TRAIL抵抗的可行性和相关机制，为逆转鼻咽癌TRAIL抵抗奠定新的理论基础。本项目按照计划书规定任务积极开展研究工作，已经按时完成了计划书中的研究内容并达到预期目标。课题执行期间在国际杂志上共发表SCI论文2篇，中文核心期刊论文2篇。