应用地黄饮子和补肾益智汤以方测证探寻阿尔茨海默病肾虚精亏证机制研究

Alzheimer's disease is a kind of neurodegenerative disease that seriously endangering human lives and health, tau hyperphosphorylated played potential roles in the pathomechanism, and TCM think that its etiology and pathogenesis is deficiency of kidney and the typical syndrome is syndrome type of essence deficiency of kidney. This project as the guidance of combination with decoction and syndrome, using syndrome type of essence deficiency of kidney as research subjects, angling to the same syndrome with different decoction，then applying Dihuang decoction and kidney puzzle decoction to composite analysis the difference between holistic metabolin and local typical pathological through the method of protein express in immunohistochemistry and western blot, finally finding the key link of syndrome type of essence deficiency of kidney in Alzheimer's disease.

阿尔茨海默病是一类严重危害人类生命健康的神经退行性疾病，Tau蛋白异常磷酸化是其典型病理机制，中医认为肾虚是其基本病因病机，肾虚精亏证是其典型证侯。本项目以AD肾虚精亏证为研究对象，在“方证相应”的前提下，从“同证异方”的角度入手，分别用地黄饮子和补肾益智汤干预，检测血液、尿液、海马中小分子代谢物，用免疫组化和Western blot 检测Tau蛋白磷酸化位点（Thr205、Thr181、ser396、ser404、ser231）的蛋白表达，综合分析整体代谢物和局部典型病理两个层面起效机制中的异同之处，找出AD肾虚精亏证生物学机制中的主要环节/节点、次要环节/节点，为AD肾虚精亏证的微观辩证提供参考。

研究背景：阿尔茨海默病是一类严重危害人类生命健康的神经退行性疾病，中医认为肾虚是其基本病因病机，肾虚精亏证是其典型证侯。为阐释AD肾虚精亏证的生物学机制，本研究在“方证相应”的前提下，从“同证异方”的角度，应用地黄饮子和补肾益智汤两首方剂进行干预，对比分析以探寻AD肾虚精亏证微观机制，为AD肾虚精亏证的微观辩证提供参考。.主要研究内容：构建阿尔茨海默病肾精亏虚证病证结合大鼠模型，分别应用地黄饮子和补肾益智汤进行干预，应用1HNMR代谢组学方法研究各组血清、尿液的代谢组学特征，应用超高效液相色谱-质谱联用技术研究海马组织中的代谢组学特征，确定生物标志物，探讨相关代谢途径。.重要结果和关键数据：①检测出AD肾虚精亏证组血清中的缬氨酸、异亮氨酸、乳酸等14个差异代谢物；尿液中的α-酮戊二酸、柠檬酸、牛磺酸等17个差异代谢物；海马组织中的烟酰胺、次黄嘌呤、乙酰左旋肉碱等45个差异物。②地黄饮子干预后可使AD肾虚精亏证组血清中丙氨酸、N-乙酰糖蛋白等10种代谢物回调，尿液中乳酸、N-乙酰糖蛋白、乙酰乙酸等11个代谢物回调，海马组织中肌酸、L-苯丙氨酸等23种物质回调；补肾益智汤干预后可使AD肾虚精亏证组血清中缬氨酸、异亮氨酸等12种代谢物回调，尿液中乙酸、乙酰胺、N-乙酰糖蛋白等10种代谢物回调，海马组织中肌酸、油酰胺、L-苯丙氨酸等19种物质回调。.科学意义：本研究检测出的AD肾虚精亏证的差异代谢物与糖代谢、氨基酸代谢、脂质代谢、TCA循坏、氧化应激、嘌呤代谢等多方面的代谢紊乱相关，共同构成AD肾虚精亏证的生物学基础。地黄饮子和补肾益智汤可不同程度地改善以上代谢的紊乱。对比两首方剂干预后代谢物回调的情况，本次研究结果提示血清中磷酸胆碱、亮氨酸、蛋氨酸，尿液中N-乙酰糖蛋白、三甲基甘氨酸，海马中的DL-乳酸、L-苯丙氨酸、苯乙醇胺、L-正亮氨酸、全氟壬酸、Dimethachlor OXA可能为AD肾虚精亏证的主要标志代谢物。