冠心病血栓前状态炎症-血小板-血栓形成相关miRNA筛选及活血化瘀中药作用机理研究

The main pathology of coronary heart disease and cardiovascular events is coronary artery thrombosis, and the key aspect of the formation of coronary artery thrombosis is platelet activation and inflammation. Thus, to explore the molecular mechanism of prethrombotic state and the effect of traditional Chinese medicine through platelet activation and inflammation is of great importance for the prevention of cardiovascular events in coronary heart disease. On the basis of previous work, this issue selects stable angina patients in the prethrombotic state by nailfold microcirculation test and platelet aggregation rate examination, and screens the target miRNAs by means of chip technology based on inflammation - platelets - thrombus network. And then the regulation effect of these target miRNAS will be studied through apoE knockout mice model of atherosclerosis, microthrombosis model in rats and endothelial cell injury model. Based on these, we further explore the effect of Huoxue huayu medicine on platelet activation, atherosclerotic plaques to identify the molecular mechanism of miRNA on prethrombotic state and provide experimental evidence and molecular targeting for the usage of traditional Chinese medine.

冠心病心血管事件发生的主要病理基础为冠状动脉内血栓，诱发冠状动脉内血栓形成的关键病理环节是炎症反应和血小板活化。因此，从炎症反应和血小板活化方面探索血栓前状态发生和活血化瘀中药对其干预的分子机理，对预防冠心病心血管事件具有重要意义。本课题在前期工作的基础上，基于炎症-血小板-血栓网络，通过甲襞微循环和血小板聚集率筛查冠心病稳定性心绞痛血栓前状态患者，利用芯片技术筛选与炎症-血小板-血栓形成相关的目标miRNA；通过apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型、大鼠冠脉微血栓模型和内皮细胞损伤模型，研究目标miRNA对炎症-血小板-血栓网络的调控作用。在此基础上，观察活血化瘀中药稳定动脉粥样硬化斑块、抑制血栓形成的效应，探索其调控炎症-血小板-血栓形成相关miRNA表达的分子机理，以为活血化瘀中药预防冠心病血栓前状态血栓形成提供实验依据和分子靶向。

炎症-血小板-血栓网络的失衡与冠心病血栓前状态及心血管病事件的发生密切相关，而相关microRNAs（miRNAs）可能在其中发挥关键调控作用。大量研究已证实用于治疗冠心病的多种活血化瘀中药均有抗炎、抗血小板作用。本课题通过文献研究、临床筛选和验证明确与炎症-血小板-血栓形成相关的miRNAs并分析其在冠心病血栓前状态中的调控作用；通过体外建立巨噬细胞炎症模型、在体建立冠脉微血栓大鼠模型和急性心肌梗死大鼠模型，观察活血化瘀中药改善冠心病血栓前状态的效应，并从相关miRNAs及其靶基因介导的炎症-血小板-血栓网络探讨其分子机理。. 文献研究发现，miRNAs在血栓前状态的多个病理环节中都发挥重要调控作用，包括内皮功能失调、炎症反应和血小板活化等，并可在冠心病中存在差异表达，因而miRNAs或许能够成为冠心病血栓前状态新的生物标志物和治疗靶点；临床研究发现，miR-34a-5p高表达与冠心病血栓前状态相关，有希望成为冠心病血栓前状态的生物标志物和治疗靶点；体外研究发现，活血化瘀中药可通过抑制NFκB/TRL4通路激活减轻炎症反应，其机制与下调miR-34a-5p、上调靶基因Sirt1和蛋白表达的效应有关；在体研究发现，活血化瘀中药能够改善内皮功能、抗血小板及抗炎，进而抑制冠脉微血栓形成并保护受损心肌，其机制可能与调控miR-34a-5p/Sirt1信号通路及其下游eNOS和NFκB蛋白有关。. 本课题不仅为冠心病血栓前状态的诊断提供了新的思路，也为活血化瘀中药治疗冠心病血栓前状态、预防血栓形成提供实验依据，具有重大的临床意义。