β肾上腺素受体调节树突状细胞外迁参与动脉粥样硬化斑块消退的机制研究

树突状细胞外迁出斑块是动脉粥样硬化斑块消退的最重要的细胞机制之一，但其具体的分子调控机制有待阐明。大量的研究证实：β肾上腺素能受体参与调控树突状细胞的迁移功能，为此我们提出"β肾上腺素受体调节斑块内DCs细胞的外迁参与斑块消退"的新机制，拟在体外细胞模型中，给予不同的β受体阻滞剂干预，结合信号通路药物和siRNA，通过Transwell小室和体外跨内皮迁移实验，观察对DCs迁移和相关细胞因子分泌的影响；然后通过给apoE基因敲除小鼠移植同遗传背景的GFP小鼠的DCs细胞，再给予药物干预，采用MRI、活体荧光成像、荧光显微镜和流式细胞仪分析斑块变化与DCs迁移的关系，重点就"NE-βAR/TLR-β-arrestin2-IκB-NF-κB-MMP-9/CCR7"这一病理轴展开研究，该研究有助于验证上述机制，同时为临床干预提供新思路。

树突状细胞外迁出斑块是动脉粥样硬化斑块消退的最重要的细胞机制之一，但其具体的分子调控机制有待阐明。大量的研究证实：β肾上腺素能受体参与调控树突状细胞的迁移功能，为此我们提出"β肾上腺素受体调节斑块内DCs 细胞的外迁参与斑块消退"的新机制。.具体研究发现如下：.1）为满足实验所需的大量细胞，依照文献报道，摸索建立了建立小鼠脾脏来源的树突状细胞长期培养体系（long term-dendritic cells），经流式细胞鉴定其表型为CD80+，CD86-，同时CD11c、CD11b、c-kit低水平表达；2）给予去甲肾上腺素干预，浓度梯度依次为10-5 M、10-6 M、10-7 M和10-8 M，时间梯度依次为3小时、4小时和5小时。干预第8天收获细胞，检测发现去甲肾上腺素刺激不影响DC的凋亡；采用transwell小室结合CD1a标记下室细胞后流式分析，发现：LPS诱导促进DC细胞成熟，同时增强细胞的迁移能力，在此基础上加入去甲肾上腺素可抑制成熟DC细胞的迁移功能，以10-6 M，3小时，作用最佳；3）在去甲肾上腺素干预之前，给予不同的βAR阻滞剂预处理30分钟，分析后发现：β1AR特异性阻滞剂比索洛尔能部分阻断去甲肾上腺素对DC迁移能力的抑制作用；4）通过transwell检测，脂质负荷对DC迁移能力的影响，结果发现：10ug/ml oxLDL可促进不成熟的DC迁移，但对LPS诱导成熟的DC细胞的迁移功能则表现为抑制作用，而10-6 M，3小时的儿茶酚胺预处理可显著抑制oxLDL诱导成熟（负荷脂质）DC细胞的迁移功能；5）Western blot分析不同刺激条件下CCR7的表达水平，结果发现：经LPS诱导成熟及负荷脂质的DC细胞的CCR7表达量明显增高，加入去甲肾上腺素干预后DC细胞的CCR7表达量则显著降低。.该系列研究成果发表SCI论文1篇；参加2010年世界心脏大会，大会口头交流2篇，书面交流3篇，均收录于Circulation杂志，同时参加2011年美国心血管病会议，书面交流1篇，收录于Heart杂志；申请国家发明专利2项，实用新型专利6项，已授权5项。获得2010年东方心脏病学会议获得论文三等奖一次，2010年中国中西医学会心血管病年会论文一等奖，2012年获得上海市康复医学科技奖一等奖。培养了共计2名博士研究生。