补肾解毒通络方通过调控Sirt1抑制HMGB1诱导的类风湿关节炎滑膜血管新生的机制研究

Angiogenesis of Synovium is an important factor causing bone destruction in rheumatoid arthritis(RA).High mobility group box protein-1(HMGB-1) released plays an key role in the induction of angiogenesis.Recent studies have found that silent information regulator1 (SIRT1) could be negative to the regulation of HMGB1 induced angiogenesis pathway as the protection in RA,thereby inhibiting angiogenesis. BuShenJieDuTongLuo Decoction has been confirmed that it has the clinical curative effect and the inhibiting angiogenesis effect,in which medicine have an up regulation effect on Sitr1.Accordingly, the hypothesis " Inhibition of HMGB1-Induced Angiogenesis of Synovium by the BuShenJieDuTongLuo Decoction via SIRT1 Activation from Rheumatoid Arthritis." is put forward.This study will adopt collagen-induced arthritis rats and human microvascular endothelial cells, RA synovial into fiber cells cultured in vitro, to observe the effect of Bushen Jiedu Tongluo Decoction on vascular endothelial cell proliferation and angiogenesis induced by HMGB1 and the modulatory role on the HMGB1-NF kappaB-HIF-1alpha-VEGF biological informat transmission regulated by SIRT1.It is of great significance to make the mechanism clear of Chinese medicine in RA angiogenesis and to guide the further clinical research and development of new drugs.

滑膜血管新生是类风湿关节炎（RA）引起骨破坏的重要因素，高迁移率族蛋白1（HMGB1）在诱导血管新生中起关键作用，新近发现沉默信息调节因子1（Sirt1）可作为RA的保护因子负向调节HMGB1诱导的血管新生通路，从而抑制血管新生。已明确补肾解毒通络方临床疗效显著，可抗血管新生，其包含的中药成分对Sitr1有上调作用。鉴此，本课题提出“补肾解毒通络方通过上调Sirt1水平，从而抑制HMGB1诱导的RA滑膜细胞血管新生”假说。拟采用胶原诱导型关节炎大鼠模型以及体外培养人微血管内皮细胞株、RA滑膜成纤维细胞，观察补肾解毒通络方对HMGB1诱导下的血管内皮细胞增殖和血管生成的影响以及该方对Sirt1调控的HMGB1-NF-κB-HIF-1α-VEGF生物信息传递的调节作用。这对于明确中药在RA血管新生中的作用机制，并对指导临床应用和进一步的新药研发具有重要意义。

本课题以胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠模型、人脐静脉内皮细胞（HUVECs）以及RA滑膜成纤维细胞（FLS）为观察对象，与Sirt1激动剂SRT1720作阳性对比，研究补肾解毒通络方（BSJDTL）对血管生成的作用以及对Sirt1、HMGB1（p56）、NF-κB、HIF-1α、VEGF表达的影响，同时体外分别加入Sirt1、NF-κB抑制剂（Sirt1-IN-1、PDTC），从正反两方面探讨该方对Sirt1调控的HMGB1-NF-κB-HIF-1α-VEGF生物信息传递的调节作用。结果显示BSJDTL在体内及体外研究中的作用存在剂量依赖关系，且中药高剂量组与Sirt1激动剂（SRT1720）作用相当，该方能显著改善CIA大鼠关节炎症，病理表现显示该方能够明显减少HMGB1诱导下的滑膜血管新生和炎症细胞，抑制CD31+表达量，降低MVD，减少滑膜中HMGB1、NF-κB（p56）、HIF-1α、VEGF的含量，提高Sirt1水平，降低HMGB1、HIF-1α乙酰化水平，并且BSJDTL可明显抑制HMGB1诱导的HUVEC细胞增殖、迁移能力，减少血管形成，诱导HMGB1刺激下的HUVEC、RAFLS细胞凋亡，减少HUVEC、RAFLS细胞中HMGB1、NF-κB（p56）、HIF-1α、VEGF的含量，提高Sirt1水平，降低RAFLS细胞中HMGB1、HIF-1α乙酰化水平。在RAFLS细胞加入Sirt1-IN-1后，BSJDTL+Sirt1-IN-1较模型组Sirt1表达水平升高，HMGB1、NF-κB（p65）、HIF-1α和VEGF表达水平降低，但作用水平不及单纯中药组，在RAFLS细胞加入PDTC后，BSJDTL+PDTC较模型组NF-κB（p65）、HIF-1α和VEGF表达水平降低，但下降水平不及单纯中药组。通过以上结果得出结论：补肾解毒通络方能够抑制HMGB1诱导的RA滑膜新生，上调Sirt1水平是该方作用于血管新生的关键环节之一，其中抑制HMGB1激活的NF-κB/HIF-1α/VEGF通路以及使HIF-1α乙酰基失活是该方上调Sirt1水平后发挥作用的主要途径，但并非唯一途径。