左归丸促血管生成的三维机制研究及其与循环EPCs的关系

We’ve observed that Zuogui Wan could improve follicular and uterine development and angiogenesis of 160～170g rats, measured by infusion with ink. With the methods of the quantitative analysis for the three-dimensional architecture of the reproductive organ vessels of presenile rats using vascular cast and scanning electron microscopy, the detection on the levels of peripheral endothelial progenitor cells and estradiol and vascular endothelial growth factor, and the observation of the effect on the proliferation of vascular endothelial cells and the three-dimensional angiogenic model structure of Zuogui Wan medicated serum preparated by high performance liquid chromatography, we will further study the effect of Zuogui Wan on promoting angiogenesis of eproductive organs in order to provide the basis of three dimensional morphology in vivo and in vitro for studying the mechanism of promoting angiogenesis of herbs invigorating kidney.The results of this study are helpful to enrich the theoretical significance of ‘nourishing kidney and promoting vascular growth’, increase the objective connotation of the theory of ‘kidney dominating reproduction’ and ‘Essence and Blood being derived from the same source’, and to provide the basis for safe clinical application of Zuogui Wan for preventing and treating women's genital dysfunction.

本项目拟在前期应用墨汁灌注法观察生殖道血管发现左归丸可促进幼龄大鼠卵巢、子宫肌层血管生成的基础上，通过应用血管铸型扫描电镜法对初老大鼠生殖器官血管三维构筑进行定量分析,检测外周内皮祖细胞及其促动员因素雌二醇和血管内皮生长因子水平，并应用高效液相色谱复方成分峰监测左归丸含药血清制备，观察左归丸含药血清对血管内皮细胞增殖和三维血管生成模型结构的影响，进一步探讨左归丸促生殖器官血管生成的作用机制，为补肾中药的促血管生成作用机制研究提供体内外三维形态学和细胞分子水平上的依据。本研究结果有助于丰富“补肾生脉”的理论意义，增加中医“肾主生殖”、“精血同源”的客观化内涵，并为临床安全应用经典名方左归丸防治妇女生殖功能低下提供依据。

本项目在前期应用墨汁灌注法观察生殖道血管发现左归丸可促进幼龄大鼠卵巢、子宫肌层血管生成的基础上，进一步探讨了左归丸促生殖器官血管生成的作用机制，为补肾中药的促血管生成作用机制研究提供了体内外三维形态学和细胞分子水平上的依据。研究发现，应用血管铸型扫描电镜法对大鼠生殖器官血管三维构筑进行定量分析，各组大鼠镜下均可见不同发育阶段的卵泡、黄体，致密的子宫血管网以及含有大量螺旋动脉的阴道；左归丸高剂量组可增加初老大鼠卵巢、子宫、阴道血管数，增大血管内径及血管面积百分比,P＜0.05或P＜0.01。左归丸可明显增加初老大鼠各级生长卵泡数、黄体数、卵巢血管数，提高大鼠血清雌二醇（E2）、血管内皮生长因子（VEGF）及内皮祖细胞（EPCs）水平,P＜0.05或P＜0.01。高效液相色谱(HPLC)监测制备含药血清，左归丸灌胃后2h可达最高药物吸收峰值，左归丸低剂量组（72h），高剂量组（24h、48h、72h）对血管内皮细胞(HUVEC)均有增殖作用，P＜0.05或P＜0.01。左归丸低、高剂量组可增加内皮小管的面积、长度、管径及生成指数，P＜0.01。此外，雷公藤多苷灌胃造成卵巢功能低下模型后大鼠动情周期延长，灌服左归丸后大鼠动情周期逐渐恢复至正常，卵巢、子宫指数增高，P＜0.05或P＜0.01；PLGF、Flt-1水平明显增高，P＜0.01。提示左归丸可以改善初老大鼠生殖器官的微血管三维立体构筑，通过上调E2、VEGF 水平，动员EPCs，促进卵巢血管生成，改善初老大鼠卵巢功能。HPLC监测下制备的左归丸含药血清能够促进血管内皮细胞的增殖，增大小管的面积、长度、管径及成管指数，从而促进血管生成。另外，左归丸可以通过上调雷公藤多苷模型大鼠卵巢组织PLGF，FLT-1水平，促进卵巢血管的生成，从而改善卵巢功能低下状态。本研究结果丰富了“补肾生脉”的理论意义，增加了中医“肾主生殖”、“精血同源”的客观化内涵，并为临床安全应用经典名方左归丸防治妇女生殖功能低下提供了依据。