四妙勇安汤活性部位通过激活PPARγ募集Tregs稳定动脉粥样硬化斑块的分子机制研究

Regulatory T cell Tregs stabilizating atherosclerotic plaques have been paid more and more attention.Recent studies have shown that activation of PPAR γ can significantly promote Tregs aggregation.Previous studies showed that Si-miao-yong-an decoction could activate PPAR γ to stabilize ApoE-/- AS plaque,and studies in vitro showed that its core medicinal site CS05 could activate PPAR γ significantly.Therefore, we propose the hypothesis that CS05 activates PPAR γ recruitmentTregs, inhibits inflammation and stabilizes AS plaques.In this experiment,we adopt the ApoE-/- mouse as plaque model and the 3T3-L1 adipocyte differentiation model , through experiment of primary spleen cells induced by ox-LDL, co culture experiment of THP-1 and Tregs ,to clarify its pharmacological effects as ligands to activate of ppar γ and recruit of tregs ,then rosiglitazone and PPAR γ blockers are used as control to study the molecule mechanism of CS05 on activating PPAR γ to promote Tregs accumulation, to inhibit inflammatory response and stabilize AS plaque .In this paper, a new idea on the pharmacological action and mechanism of traditional Chinese medicine (TCM) in the prevention and treatment of AS will be developed, which lay a foundation for the development of natural PPAR γ agonists with Tregs recruitment.

调节性T细胞（Tregs）稳定AS斑块研究正受到广泛关注。最近研究证实，激活PPARγ可显著促进Tregs聚集。前期研究发现解毒活血抗炎经典名方四妙勇安汤可激活PPARγ稳定ApoE-/-小鼠AS斑块，体外研究显示其核心药用部位CS05具有激活PPARγ作用。由此，我们提出“CS05激活PPARγ募集Tregs ，抑制炎症，稳定AS斑块”假说。拟基于ApoE-/-小鼠AS斑块模型和3T3-L1前脂肪细胞分化模型、ox-LDL诱导原代脾细胞、THP-1与Tregs共培养细胞实验，明确其活性部位CS05是否具有激活PPARγ，募集Tregs的药理作用，进而以罗格列酮和PPARγ阻断剂为对照，从体内外探讨CS05激活PPARγ促进Tregs累积，抑制炎症反应，稳定AS斑块的分子机制。本课题有望开拓中医药防治AS药理作用及机制研究的新思路，为研制具有募集Tregs的天然PPARγ激动剂奠定基础。

动脉粥样硬化是心脑血管疾病最重要的病理基础，是导致急性心肌梗死和脑中风等急性心脑血管疾病发生的主要原因。慢性炎症性反应贯穿AS发生、发展及斑块破裂的始终。其发病机制极其复杂，涉及内皮细胞功能障碍，脂质堆积，泡沫细胞形成，血管平滑肌细胞迁移以及炎症因子浸润等多个环节，如何防治至今依然是医学界的研究难点。近年来 Tregs 抑制炎症反应，稳定 AS 斑块的基础和临床研究成为心血管领域的热点，且 Tregs 有望成为 AS 治疗新靶点。PPAR-γ在调节糖脂代谢和AS的发生发展过程中发挥重要作用，研究证实激活PPAR-γ可显著促进Tregs聚集，减轻炎症反应，稳定AS斑块。已结题的一项国自然基金发现四妙勇安汤能够激活PPAR-γ稳定ApoE-/-小鼠AS斑块，体外研究显示其核心药用部位CS05具有激活PPAR-γ作用。提出“CS05激活PPAR-γ募集Tregs，抑制炎症，稳定AS斑块”假说。本项目首先采用右侧颈总动脉套管术+高脂饲料制备ApoE-/-小鼠AS的动物模型，研究四妙勇安汤（SMYA）—活性部位（SM-CS05）—活性成分（异甘草素）通过抑制炎症因子，减轻颈动脉斑块病理状态及易损性，结合3T3-L1 前脂肪细胞诱导为脂肪细胞实验、原代培养的脾脏细胞和 THP-1 细胞泡沫化后与 Tregs 共培养的细胞实验，从整体动物水平和细胞水平验证了AS炎症状态下PPAR-γ被抑制，Tregs 表达的Foxp3蛋白降低，AS的炎症反应增强，斑块不稳定增加，SMYA、SM-CS05和异甘草素能够作为配体激活PPAR-γ，使得其下游分子LXR-α和GLUT-4蛋白表达增加，FABP-4蛋白表达降低，促进Tregs 聚集，增强Fox-p3、TGF-β和IL-10蛋白表达，减轻MMP-2、MMP-9蛋白水平，发挥降低AS炎症反应，稳定斑块的药理作用及分子机制，验证本项目的科学假说。为AS的临床治疗用药提供思路，为开发具有募集 Tregs 作用的天然 PPAR-γ 激动剂奠定实验基础。