基于《金匮》"虚劳建中"理论探讨建中理劳汤对慢性肾衰及TGF-β/smad通路的影响研究

TGF-β/Smad signal pathway has close relationship with the progress of renal fibrosis.Based on the thoery of "reinforcing middle-energizer to treat cosumption diseases"from Synopsis of Golden Chamber,we propose a significant therapeutic method focusing on chronic renal failure- - reinforcing middle-energizer according to literature and analysis of the precedent subject research results.In this study the techniques including immunohistochemistry,Western blot,ELISA,RT-PCR,etc.were adopted.Through the adenine method setting up models of CRF,we aim at observing Jianzhonglilao Decoction with an emphasis on reinforcing middle-energizer how to recover rat models' renal function and affect expressing mRNA and protein which is related to renal TGF-β/Smad signal pathway;surveying that what changes would appear for Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ types collagen ,FN,MMP-2,MMP-9 and its inhibitor TIMP-1、TIMP-2 in extracellular matrix components;looking into the above index transformations and how Jianzhonglilao Decoction intervene them by applying TGF-β1 to induce mesangial cells in vitro.This study could illustrate Jianzhonglilao Decoction's effect and mechanism in TGF-β/Smad signal pathway regulating extracellular matrix synthesis and degradation,in order to provide a scientific basis for reinforcing middle-energizer method applying chronic renal disease prevention and cure.

TGF-β/Smad信号通路与慢性肾衰纤维化的进展过程有着密切联系。从《金匮》"虚劳建中"理论出发，依据文献及前项课题研究实验结果分析，我们提出以建补中气为主是治疗慢性肾功能衰竭的重要治法。本研究通过腺嘌呤法复制慢性肾衰大鼠模型，采用免疫组织化学、Western blot、ELISA、RT-PCR等方法，观察建中为主的建中理劳汤对模型大鼠肾功能恢复，肾脏TGF-β/Smad通路相关蛋白及mRNA表达的影响；观察细胞外基质成分Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、FN、MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-1、TIMP-2的变化；并应用TGF-β1体外诱导系膜细胞，观察上述指标的变化及建中理劳汤的干预作用。阐明建中理劳汤对TGF-β/Smad信号通路调控细胞外基质合成及降解的作用及机制，为建中法为主防治慢性肾衰提供科学依据。

TGF-β/Smad信号通路与慢性肾衰纤维化的进展过程有着密切联系。从《金匮》“ 虚劳建中”理论出发，依据文献及前项课题研究实验结果分析，我们提出以建补中气为主是治疗慢性肾功能衰竭的重要治法。本研究通过腺嘌呤法复制慢性肾衰大鼠模型，观察了以建中治法为主的建中理劳汤对模型大鼠肾功能恢复作用；观察了模型肾脏纤维化过程中细胞外基质成分Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、FN、MMP-2、MMP-9 及其抑制因子TIMP-1、TIMP-2 的变化，观察了肾脏TGF-β/Smad通路相关蛋白及mRNA表达的影响。并应用TGF-β1体外诱导系膜细胞，观察上述指标的变化及建中理劳汤的干预作用。本研究主要有如下几个方面的发现：①建中理劳汤能减少慢性肾衰大鼠24小时尿蛋白含量，与模型组相比较有显著性差异(P<0.01)；可降低慢性肾衰大鼠血中的尿素氮，与模型组比较有显著性差异(P<0.01)；能降低慢性肾衰大鼠血中的肌酐的含量，与模型组相比较有显著性差异(P<0.01)；说明本方能够缓解慢性肾功能衰竭大鼠症状，延缓慢性肾功能衰竭的进展。②建中理劳汤能降低尤其是低剂量建中理劳汤作用效果更好能够抑制I型胶原和Ⅲ型胶原的过度表达，从而减少胞外基质的沉积，延缓肾组织纤维化，但对建中理劳汤对IV胶原蛋白过度表达没有明显抑制作用。③建中理劳汤可明显抑制 TGF-β1诱导的大鼠肾小球系膜细胞的增殖，增加基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9的表达（P<0.05），同时抑制基质金属蛋白酶抑制剂-1、基质金属蛋白酶抑制剂-2的表达（P<0.05），从而改善慢性肾衰纤维化。④建中理劳汤对肾脏纤维化过程中相关胶原、基质金属蛋白酶及抑制剂的影响，可能是通过降低磷酸化Smad2、磷酸化Smad3的表达，提高Smad7的表达来实现的。本项目的完成，较好的阐释了建中理劳汤对TGF-β/Smad信号通路调控细胞外基质合成及降解的作用及机制，为建中法为主防治慢性肾衰提供了科学依据。