应用二维双向电泳技术对肠神经系统发育成熟度蛋白分子标志物的筛选与鉴定

应用差异双向电泳技术(Ettan DIGE)对正常和ENS异常病人肠壁神经细胞蛋白质组分析，筛选差异表达的蛋白质，结合MALDI ToF质谱和生物信息学技术鉴定，应用免疫组化和原位杂交技术对其在疾病中的表达做验证，发现对ENS发育成熟度有诊断意义并可通过简单的形态学染色证实的蛋白分子标志物。构建针对诊断特异性最强标志物的表达载体，应用RNA干扰技术对小鼠受精卵和体外培养的肠神经嵴干细胞标志物蛋白的mRNA干扰，使标志物蛋白分子的mRNA降解，表达缺失，结合胎儿外科技术使胎鼠成活，应用免疫组化和原位杂交等技术观察正常和标志物缺失小鼠ENS胚胎发育不同时期ENS发育的形态特点，阐述ENS的发生和演变规律，证实这些蛋白分子标志物对评价肠神经系统发育成熟度的作用，为临床诊断提供依据。