凉膈散对内毒素急性肺损伤肺水转运的影响及机制研究

本项目以"肺主肃降"、"通调水道"等中医脏象理论为指导，结合现代医学关于急性肺损伤发生发展病理过程的认识，在先期关于凉膈散对内毒素诱发急性肺损伤保护作用研究获得肯定结果的基础上，提出改善急性肺损伤发生过程中肺水转运系统障碍，恢复"肺主肃降"、"通调水道"功能，可能是凉膈散保护内毒素性急性肺损伤的重要机制。针对肺水转运障碍及肺水肿形成的关健环节，采用分子生物学、细胞生物学及膜片钳电生理等实验技术，进一步明确凉膈散对于内毒素诱发急性肺损伤肺水转运的影响，并从肺组织水通道蛋白、钠通道及Na+-K+-ATP酶等钠水主动转运系统探讨其作用机制，为凉膈散及清上泻下法防治急性肺损伤提供实验依据，亦为中西医结合提高急性肺损伤救治效果探索新途径。

本项目以 “肺主肃降”、“通调水道”等传统中医脏象理论为指导，结合现代医学关于急性肺损伤发生发展病理过程的认识和实验方法，观察该方对LPS诱导急性肺损伤大鼠模型的肺组织水液调节作用，并探讨其作用机理。本实验研究首先通过模型的筛选发现Wistar雄性大鼠支气管滴注LPS为本实验较佳给药方式和动物，成功建立大鼠急性肺损伤病理模型。随后，我们观察了凉膈散对该模型大鼠肺水转运的影响。将Wistar雄性大鼠60只随机分为正常对照组(A组) 、ALI模型组(B组)、阳性对照组（C组）、Benzamil+凉膈散低剂量组（D组）、凉膈散高剂量组（E组）、凉膈散低剂量组（F组）。B、C、D、E和F组采用支气管滴注LPS(3mg/kg)复制ALI模型，E和F组预先给予（15,7.5g生药/kg）凉膈散水煎液及每天灌胃处理，连续4天给药，造模8h后检测，观察实验各组大鼠肺脏肺泡通透指数、血管外肺水含量、血气分析，肺湿/干重比和肺组织病理学的改变，发现凉膈散各给药组明显可以改善支气管LPS所造成的急性肺损伤症状和组织损害，证明该方对内毒素ALI肺内液体的清除作用。其次，我们借助免疫组化法、免疫印迹和逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测实验大鼠肺组织α、β、γ-rENaC，Na+-K+-ATase和AQP-3在肺组织内的表达。通过应用凉膈散和地塞米松对ALI的干预治疗，实验各组的α、β、γ-rENaC、Na+-K+-ATPase和AQP-3表达有明显的提高，说明ALI导致的水液转运通道的减少可能是ALI发病的机制之一，提示凉膈散可能通过活化钠通道，水通道以及Na+-K+-ATPase的功能和表达，促进.模型大鼠肺组织水液代谢和转运，减轻其肺水肿程度，从而减轻急性肺损伤。本研究还运用了钠通道阻滞剂Benzamil去分析凉膈散在钠通道阻滞的情况下，是否对水通道AQP-3和Na+-K+- ATPase的功能产生影响，结果发现凉膈散在钠通道阻滞的情况下还能提高Na+-K+- ATPase和AQP-3的表达，说凉膈散在防治ALI肺水肿时，对α、β、γ-rENaC、Na+-K+-ATPase和AQP-3是同时起作用的，这也证明中药防治疾病的多靶点效应。