Treg/Th失衡机制的转录因子、微小RNA在肾气虚哮喘中特征表达及益肾喘宁汤干预研究

Bronchial asthma has complicated pathogenesis for its heterogenity. Recently identifying the regulatory T cells (Tregs) and T helper 17 (Th17) cells led to breaking the dichotomy of Th1/Th2 cells axis in immune responses involved in asthma. Therefore proclaiming the complex interactions between Tregs and Th cells are the key link of asthma pathogenesis exploration. .Our research group has already established the Kidney-Qi-Deficiency asthma model successfully, and found that the Yi-Shen-Chuan-Ning decoction combined with Becotide can correct the Th1/Th2 disequilibrium through transcription factors in our early research findings. Therefore based on the early research findings, we plans to using the Kidney-Qi-Deficiency asthma model to detect the T cell subsets associated specific transcription factors、key cytokine and microRNAs, in order to discuss the internal mechanisms between kidney-qi-deficiency asthma and Th1/Th2 disequilibrium. We are aimed at exploring the multi-target mechanisms for TCM compound asthma treatment, and providing the theoretical foundation and new thinkings for it.

支气管哮喘是一种异质性疾病，其发病机制复杂多样。近年来调节性T细胞（Treg）和辅助性T细胞17（Th17）的发现，修正了传统的因Thl/Th2失衡而引发哮喘的致病理论。因此揭示Treg与Th之间复杂关系是探索哮喘发病机制和治疗方法的关键环节之一。.本课题组在前期研究中已建立肾气虚哮喘病证结合大鼠模型，并观察到益肾喘宁汤联合糖皮质激素可以通过调节转录因子的表达来纠正Th1/Th2失衡。现拟应用肾气虚哮喘模型，以T细胞亚群（Th1、Th2、Th17、Treg）的特异性转录因子、关键细胞因子和在中医证候研究中鲜有报道的microRNA为指标，研究肾气虚哮喘发病与Treg/Th平衡的内在机制，在上述分子水平上探讨益肾喘宁汤显效靶点和肾气虚证本质的物质基础，为揭示哮喘发病机制和证本质研究提供理论基础，为疾病的诊断和治疗提供新的思路。

肾气虚证哮喘是临床上常见的支气管哮喘证候类型，益气喘宁汤是历代医家用于治疗咳喘的经典处方，该方具有补肺益肾，理气化痰平喘之功效，临床疗效好。支气管哮喘发病机制复杂多样，近年来调节性T细胞(Treg)和辅助性T细胞17(Th17)的发现，修正了传统的因Thl/Th2失衡而引发哮喘的致病理论。因此揭示Treg与Th17之间复杂关系是探索哮喘发病机制和治疗方法的关键环节之一。本项目首先模拟中医病因，以多因素复合法建立了肾气虚证哮喘大鼠模型。从宏观症状体征观察、组织病理学观察及微观指标血清睾酮(T)、血清皮质醇(COR)、血清甲状腺素(T4)的检测等方面证实肾气虚证哮喘模型造模成功。并进一步比较正常组、模型组以及给药组大鼠脾脏中Th17、Treg、Th1、Th2细胞、肺泡灌洗液(BALF)中细胞因（IL-6、IL-17、TGF-β等）、肺组织中转录因子与细胞因子的基因、免疫印迹(RORγt、Foxp3、IL-6 、TGF-β)以及miRNA 等生物指标的差异，以揭示肾气虚证的本质，探讨益气喘宁汤治疗肾气虚证哮喘的作用机制。在研究中发现，肾气虚证哮喘大鼠肺泡灌洗液及肺组织的IL-6升高，肺组织中Treg转录因子Foxp3的mRNA及免疫印迹也升高，并在肾气虚证哮喘大鼠体内筛选到可调控IL-6的miR-155以及调控Foxp3的miR-34均低表达，提示miR-34/IL-6、miR-155/Foxp3可能与哮喘肾气虚证有关。益肾喘宁汤在基因和蛋白层面，均可使IL-6、Foxp3作用增强，并与西药合用具有协同效应。这可能与miRNA的调控有关。筛选中药组与肾哮组之间有差异的miRNA，发现多条目前报道与IL-6、Foxp3转录相关的miRNA，如miR-155、miR-181，miR-let-7家族、miR-31、miR-134 、miR-210等在两组表达有差异，提示益肾喘宁汤可通过调节Th/Treg平衡发挥临床疗效。此外，在研究中还发现使用益肾喘宁汤治疗的肾气虚证哮喘大鼠的miR-423-5p表达改变，miR-423-5p可调控三叶因子，参与机体抵御应激反应或致机体氧化应激损伤，提示益肾喘宁汤可能还通过促进上皮细胞增殖、凋亡和迁移的能力，进而增强肺上皮组织的损伤修复能力的提高，达到治疗哮喘的作用。